| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 生长素、乙烯对器官脱落的影响 | 第12-14页 |
| 1.1.1 生长素与器官脱落 | 第12-13页 |
| 1.1.2 乙烯与器官脱落 | 第13-14页 |
| 1.1.3 生长素对器官脱落的作用大于乙烯 | 第14页 |
| 1.2 生长素酰胺水解酶 | 第14-15页 |
| 1.2.1 拟南芥中生长素酰胺水解酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 桃中生长素酰胺水解酶 | 第15页 |
| 1.2.3 植物中生长素氨基酸共轭的种类 | 第15页 |
| 1.3 生长素与生长素酰胺水解酶 | 第15-16页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-28页 |
| 2.1 番茄花柄脱落率的测定 | 第17-18页 |
| 2.1.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.2 脱落率调查方法 | 第17-18页 |
| 2.2 DR5::GUS染色 | 第18页 |
| 2.2.1 染色液及脱色液的配置 | 第18页 |
| 2.2.2 染色材料 | 第18页 |
| 2.2.3 染色、脱色过程 | 第18页 |
| 2.3 番茄生长素酰胺水解酶生物信息学分析 | 第18-19页 |
| 2.3.1 番茄ILR家族基因序列的检索 | 第18-19页 |
| 2.3.2 ILR蛋白家族进化树的构建 | 第19页 |
| 2.3.3 番茄ILR基因序列信息分析 | 第19页 |
| 2.4 实验使用的所有引物序列 | 第19-20页 |
| 2.5 ILR体外酶活检测 | 第20-23页 |
| 2.5.1 原核表达重组质粒构建 | 第20-22页 |
| 2.5.2 IPTG诱导融合蛋白表达及纯化 | 第22-23页 |
| 2.5.3 催化底物反应及HPLC分析 | 第23页 |
| 2.6 qRT-PCR技术分析不同处理下ILR的基因表达量 | 第23-25页 |
| 2.6.1 ILR在不同植物组织中qRT-PCR检测 | 第23-24页 |
| 2.6.2 ILR在不同处理下qRT-PCR检测 | 第24页 |
| 2.6.3 转基因植株中ILR qRT-PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.7 ILR转基因植株鉴定 | 第25-28页 |
| 2.7.1 转基因重组载体构建 | 第25-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-42页 |
| 3.1 不同处理对番茄花柄脱落率的影响 | 第28-29页 |
| 3.2 IAA-Ile处理下生长素含量的测定 | 第29-30页 |
| 3.3 番茄生长素氨基酸水解酶的获得及生物信息学分析 | 第30-33页 |
| 3.4 ILR体外酶活性鉴定 | 第33-35页 |
| 3.4.1 pET30a(+)-ILR 1-7重组质粒鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4.2 ILR1-7融合蛋白表达及纯化电泳检测 | 第34-35页 |
| 3.4.3 体外酶活性检测 | 第35页 |
| 3.5 番茄生长素酰胺水解酶在不同组织中的表达 | 第35-36页 |
| 3.6 番茄生长素酰胺水解酶ILR在脱落过程中的表达特异性分析 | 第36-38页 |
| 3.7 ILR沉默转基因番茄遗传转化 | 第38-42页 |
| 3.7.1 RV2-ILR 1-7重组质粒鉴定 | 第38-39页 |
| 3.7.2 转基因番茄植株阳性鉴定 | 第39-41页 |
| 3.7.3 转基因植株脱落率的测定 | 第41-42页 |
| 4 讨论与结论 | 第42-46页 |
| 4.1 结合态生长素的研究 | 第42-43页 |
| 4.2 生长素酰胺水解酶生物信息学分析 | 第43页 |
| 4.3 生长素酰胺水解酶活性研究 | 第43页 |
| 4.4 生长素酰胺水解酶的作用 | 第43-44页 |
| 4.5 生长素酰胺水解酶突变体及转基因植株 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第53-54页 |
