| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 拟南芥谷氨酰-tRNA还原酶 | 第9-12页 |
| 1.1.1 谷氨酰-tRNA还原酶的研究进展 | 第9-12页 |
| 1.2 拟南芥FLU蛋白 | 第12-13页 |
| 1.3 蛋白质晶体学 | 第13-15页 |
| 1.3.1 蛋白质结晶原理 | 第13页 |
| 1.3.2 蛋白质晶体生长的影响因素 | 第13页 |
| 1.3.3 蛋白质结晶方法 | 第13-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第15页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第15-17页 |
| 2.1.4 实验主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 基因克隆与载体构建 | 第18-21页 |
| 2.2.1 基因克隆 | 第18-19页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第19-21页 |
| 2.3 蛋白表达与纯化 | 第21-24页 |
| 2.3.1 蛋白小量表达 | 第21-22页 |
| 2.3.2 蛋白大量表达纯化 | 第22页 |
| 2.3.3 亲和层析 | 第22-23页 |
| 2.3.4 分子筛层析 | 第23-24页 |
| 2.4 蛋白晶体生长条件的初筛与优化 | 第24页 |
| 2.4.1 晶体筛选 | 第24页 |
| 2.4.2 晶体优化 | 第24页 |
| 2.5 数据收集与结构解析 | 第24-25页 |
| 2.6 ITC实验 | 第25-26页 |
| 2.7 GluTR酶活性测定 | 第26-29页 |
| 2.7.1 GluTR酶活测定的原理 | 第26页 |
| 2.7.2 GluTR酶活标准曲线的绘制 | 第26-27页 |
| 2.7.3 GluTR酶活测定 | 第27-29页 |
| 第三章 FLU及FLU-GluTR复合物的晶体生长与结构解析 | 第29-42页 |
| 3.1 FLU蛋白的晶体生长与结构解析 | 第29-34页 |
| 3.1.1 FLU的序列分析 | 第29页 |
| 3.1.2 FLU的PCR扩增及表达载体构建 | 第29-30页 |
| 3.1.3 FLU截短体蛋白的表达与纯化 | 第30-32页 |
| 3.1.4 FLU截短体的晶体筛选与优化 | 第32-33页 |
| 3.1.5 FLUs3晶体的数据收集与结构解析 | 第33-34页 |
| 3.1.6 FLUs3的整体结构 | 第34页 |
| 3.2 FLU与GluTR复合物的晶体生长与结构解析 | 第34-42页 |
| 3.2.1 GluTR的序列分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 GluTR的PCR扩增及表达载体构建 | 第35-36页 |
| 3.2.3 FLU与GluTR复合物的表达纯化 | 第36-38页 |
| 3.2.4 FLU-GluTR复合物的品体筛选与优化 | 第38页 |
| 3.2.5 FLU-GluTR复合物的数据收集及结构解析 | 第38-40页 |
| 3.2.6 FLU-GluTR复合物的整体结构 | 第40-42页 |
| 第四章 FLU和GluTR及其相互作用的研究 | 第42-60页 |
| 4.1 截短与突变对GluTR及其与FLU结合的影响 | 第42-52页 |
| 4.1.1 GluTR C端15个氨基酸对其二体形成的影响 | 第42-44页 |
| 4.1.2 GluTR C端15个残基对其与FLU结合的影响 | 第44-48页 |
| 4.1.3 GluTR单点突变对其二体形成的影响 | 第48-50页 |
| 4.1.4 GluTR单点突变对其与FLU结合的影响 | 第50-52页 |
| 4.2 突变对FLU二体形成及其与GluTR相互作用的影响 | 第52-58页 |
| 4.2.1 单点突变对FLU二体形成的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.2 FLU单点突变对其与GluTR结合的影响 | 第53-56页 |
| 4.2.3 突变对FLU与GluTR相互作用的影响 | 第56-58页 |
| 4.3 FLU对GluTR的酶活抑制实验 | 第58-60页 |
| 第五章 小结 | 第60-62页 |
| 5.1 本研究取得的结果 | 第60页 |
| 5.2 本研究的创新性 | 第60页 |
| 5.3 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附录 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第73页 |
