| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 猪体细胞核克隆技术的概况 | 第11-12页 |
| 1.2 体细胞核移植的国内外现状 | 第12页 |
| 1.3 卵母细胞对猪核移植效率的影响 | 第12-14页 |
| 1.3.1 卵泡的直径 | 第12页 |
| 1.3.2 体外成熟的培养体系 | 第12-13页 |
| 1.3.3 成熟培养液 | 第13页 |
| 1.3.4 激素 | 第13页 |
| 1.3.5 其他物质 | 第13页 |
| 1.3.6 卵母细胞成熟培养时间 | 第13页 |
| 1.3.7 温度 | 第13-14页 |
| 1.4 供核细胞的影响 | 第14-15页 |
| 1.4.1 供核细胞的类型 | 第14页 |
| 1.4.2 供体细胞的性别 | 第14页 |
| 1.4.3 供核细胞所处在的时期 | 第14页 |
| 1.4.4 供体细胞的准备方法 | 第14-15页 |
| 1.5 核移植方法的影响 | 第15-16页 |
| 1.5.1 显微操作 | 第15页 |
| 1.5.2 不同去核方法的影响 | 第15页 |
| 1.5.3 注核方法 | 第15页 |
| 1.5.4 激活 | 第15-16页 |
| 1.5.5 重构胚的培养 | 第16页 |
| 1.6 Oct4介绍 | 第16-19页 |
| 1.6.1 Oct4功能及表达特点 | 第17-18页 |
| 1.6.2 Oct4-EGFP报告系统的建立 | 第18-19页 |
| 1.7 试验的研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验设备 | 第20-21页 |
| 2.1.2 试验耗材 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 相关在线网站 | 第22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.2.2 Oct4-EGFP质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3 猪卵母细胞的体外成熟 | 第24页 |
| 2.2.4 猪卵母细胞孤雌激活 | 第24页 |
| 2.2.5 复苏细胞 | 第24-25页 |
| 2.2.6 细胞传代培养 | 第25页 |
| 2.2.7 细胞的冷冻储存 | 第25页 |
| 2.2.8 大白猪胎儿成纤维细胞对新霉素毒性敏感性检测 | 第25页 |
| 2.2.9 成纤维细胞转染、筛选及鉴定 | 第25页 |
| 2.2.10 体细胞核移植的显微操作 | 第25-26页 |
| 2.2.11 重构胚的融合和激活 | 第26页 |
| 2.2.12 重构胚的培养 | 第26页 |
| 2.3 试验设计 | 第26页 |
| 2.4 数据统计分析 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-35页 |
| 3.1 化学二次激方法活对体细胞核移植重构胚发育的影响 | 第27-28页 |
| 3.2 Oct4-EGFP质粒的构建 | 第28-30页 |
| 3.3 大白猪胎儿成纤维细胞的形态特征 | 第30页 |
| 3.4 大白猪胎儿成纤维细胞对G418毒性敏感性检测 ： | 第30-31页 |
| 3.5 Oct4-EGFP重组载体转基因细胞系的构建 | 第31-32页 |
| 3.6 移植胚胎体外发育囊胚中EGFP表达活性检测 | 第32-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 4.1 Oct4可视化的意义 | 第35页 |
| 4.2 Oct4-EGFP报告系统功能 | 第35-36页 |
| 4.3 无缝克隆技术对载体构建的影响 | 第36页 |
| 4.4 新霉素的浓度对成纤维细胞毒性的敏感性的影响 | 第36页 |
| 4.5 化学二次激活对转基因细胞囊胚率的影响 | 第36-37页 |
| 4.6 EGFP在转基因囊胚中的表达 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第45页 |
