| 附件 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 血吸虫与血吸虫病 | 第14-16页 |
| 1.2 血吸虫miRNA研究概述 | 第16页 |
| 1.3 let-7 的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 高通量测序简介 | 第17-21页 |
| 第二章 正常发育和发育阻遏雌虫形态学观察及其卵黄腺凋亡水平检测 | 第21-29页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21页 |
| 2.2.1 生物材料 | 第21页 |
| 2.2.2 生化试剂 | 第21页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.3.1 尾蚴感染及血吸虫收集和处理 | 第21-22页 |
| 2.3.2 激光共聚焦标本制备及观察 | 第22页 |
| 2.3.3 透射电镜标本制备及观察 | 第22页 |
| 2.3.4 TUNEL法观察卵黄腺凋亡现象 | 第22页 |
| 2.3.5 血吸虫特异性荧光观察 | 第22页 |
| 2.4 实验结果 | 第22-27页 |
| 2.4.1 普通光学解剖镜下正常发育和发育阻遏雌虫 | 第22-23页 |
| 2.4.2 激光共聚焦显微镜下正常发育和发育阻遏雌虫的卵巢和卵黄腺 | 第23页 |
| 2.4.3 透射电镜对正常发育和发育阻遏雌虫卵黄腺的观察 | 第23页 |
| 2.4.4 正常发育和发育阻遏雌虫卵黄腺细胞凋亡的观察 | 第23-27页 |
| 2.4.5 血吸虫虫体特异性荧光现象的观察 | 第27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 正常发育与发育阻遏雌虫差异表达miRNA分析 | 第29-45页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验材料 | 第29页 |
| 3.2.1 生物材料 | 第29页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第29-33页 |
| 3.3.1 生物样本收集和RNA提取 | 第29-30页 |
| 3.3.2 RNA质量检测 | 第30页 |
| 3.3.3 高通量测序及数据生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 3.3.4 差异表达miRNA的荧光定量PCR验证 | 第31-33页 |
| 3.4 实验结果 | 第33-39页 |
| 3.4.1 RNA样品质量检测 | 第33页 |
| 3.4.2 样品之间公共及特有序列数量和种类统计 | 第33页 |
| 3.4.3 基因组比对 | 第33-34页 |
| 3.4.4 已知miRNA比对及统计信息 | 第34-35页 |
| 3.4.5 重复序列比对 | 第35-37页 |
| 3.4.6 Genbank比对 | 第37页 |
| 3.4.7 Rfam比对 | 第37页 |
| 3.4.8 外显子、内含子比对 | 第37页 |
| 3.4.9 小RNA分类注释 | 第37-38页 |
| 3.4.10 新miRNA预测及统计信息 | 第38页 |
| 3.4.11 已知miRNA差异分析 | 第38页 |
| 3.4.12 已知miRNA差异Real time-PCR验证 | 第38页 |
| 3.4.13 差异表达miRNA的靶基因预测及功能分析 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-45页 |
| 第四章 let-7 对雌虫的生殖发育影响的初步探讨 | 第45-53页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45页 |
| 4.2.1 生物材料 | 第45页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第45页 |
| 4.3 实验方法和步骤 | 第45-47页 |
| 4.3.1 技术路线 | 第45页 |
| 4.3.2 单雌产卵数和虫卵孵化率统计 | 第45-46页 |
| 4.3.3 肝脏病理组织切片实验步骤 | 第46页 |
| 4.3.4 电镜观察，实验步骤 | 第46-47页 |
| 4.3.5 干扰靶基因在体验证 | 第47页 |
| 4.4 实验结果 | 第47-48页 |
| 4.4.1 单雌产卵率和虫卵孵化率结果 | 第47-48页 |
| 4.4.2 肝脏虫卵结节观察 | 第48页 |
| 4.4.3 候选靶基因RT-PCR结果 | 第48页 |
| 4.4.4 虫体扫描电镜观察 | 第48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-53页 |
| 第五章 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
