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运输应激条件下弓形虫缓殖子向速殖子转化差异蛋白的筛选及鉴定

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
缩略语表第10-12页
1 文献综述第12-22页
    1.1 弓形虫病及危害第12-13页
    1.2 弓形虫生活史第13-14页
    1.3 弓形虫与宿主免疫应答第14-15页
    1.4 弓形虫速殖子和缓殖子的体内外转化第15-17页
        1.4.1 弓形虫速殖子和缓殖子的体内转化第15-16页
        1.4.2 弓形虫速殖子和缓殖子的体外转化第16-17页
    1.5 弓形虫速殖子和缓殖子的差异第17-19页
        1.5.1 弓形虫速殖子和缓殖子形态结构上的差异第17页
        1.5.2 弓形虫速殖子和缓殖子分子水平上的差异第17-19页
    1.6 应激与机体免疫调节第19-22页
        1.6.1 应激与运输应激第19页
        1.6.2 应激与机体免疫调节第19-20页
        1.6.3 应激与疾病预后第20-22页
2 研究目的与意义第22-23页
3 材料与方法第23-35页
    3.1 实验材料第23-26页
        3.1.1 实验动物第23页
        3.1.2 弓形虫虫株第23页
        3.1.3 主要试剂第23页
        3.1.4 ELISA缓冲液第23-24页
        3.1.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液第24页
        3.1.6 双向电泳试剂第24-25页
        3.1.7 酶标二抗第25页
        3.1.8 主要仪器第25-26页
    3.2 实验方法第26-35页
        3.2.1 PCR引物的设计和合成第26页
        3.2.2 弓形虫PRU株组织包囊的动物接种与收集纯化第26-27页
        3.2.3 运输应激的模拟第27页
        3.2.4 Total RNA的提取第27-28页
        3.2.5 Real-time PCR检测弓形虫BAG1 和SAG1 基因mRN A相对水平第28-29页
        3.2.6 TCA-酚法提取蛋白第29-30页
        3.2.7 蛋白质浓度定量测定第30页
        3.2.8 模拟运输应激对弓形虫慢性感染小鼠细胞因子的影响第30-31页
        3.2.9 双向电泳实验样品的收集与处理第31-32页
        3.2.10 弓形虫包囊蛋白的双向电泳分析第32-33页
        3.2.11 双向电泳数据分析第33页
        3.2.12 差异蛋白的质谱分析第33-34页
        3.2.13 质谱结果分析鉴定第34页
        3.2.14 差异蛋白的Real-time PCR验证第34-35页
4 结果与分析第35-50页
    4.1 弓形虫PRU株脑组织包囊的纯化与收集第35页
    4.2 弓形虫PRU株慢性感染小鼠模型的建立第35-36页
    4.3 运输应激诱发慢性感染小鼠脑组织包囊的再活化第36-38页
    4.4 运输应激条件下弓形虫慢性感染小鼠细胞因子的检测第38-40页
        4.4.1 荧光信号的采集第38页
        4.4.2 弓形虫慢性感染小鼠细胞因子的变化第38-39页
        4.4.3 运输应激条件下弓形虫慢性感染小鼠细胞因子的变化第39-40页
    4.5 运输应激条件下弓形虫缓殖子向速殖子转化差异蛋白的筛选第40-45页
        4.5.1 运输应激条件下弓形虫PRU株脑组织包囊的纯化与收集第40-41页
        4.5.2 不同应激时间脑组织包囊的蛋白提取及浓度测定第41-42页
        4.5.3 不同应激时间包囊蛋白的SDS-聚丙烯酰胺分析第42-43页
        4.5.4 不同应激时间包囊蛋白的双向电泳分析第43-45页
    4.6 弓形虫缓殖子向速殖子转化差异蛋白的质谱鉴定第45-50页
        4.6.1 鼠源蛋白的质谱鉴定第45-47页
        4.6.2 弓形虫相关蛋白的质谱鉴定第47-49页
        4.6.3 差异蛋白的Real-time PCR验证第49-50页
5 讨论第50-55页
    5.1 运输应激影响弓形虫速殖子和缓殖子的相互转化第50-51页
    5.2 运输应激影响弓形虫慢性感染小鼠的免疫水平第51-52页
    5.3 运输应激条件下弓形虫缓殖子向速殖子转化差异蛋白的筛选及鉴定第52-55页
6 结论第55-56页
参考文献第56-66页
致谢第66-67页
附录第67页

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