| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 氨肽酶概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 氨肽酶的性质和分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 氨肽酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.1.3 氨肽酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第15-17页 |
| 1.2.1 国外研究现状 | 第15-16页 |
| 1.2.2 国内研究现状 | 第16-17页 |
| 1.3 目的基因的克隆表达 | 第17-20页 |
| 1.3.1 表达质粒基本介绍 | 第18页 |
| 1.3.2 pET表达系统 | 第18-20页 |
| 1.4 课题的立题依据 | 第20-21页 |
| 1.5 课题研究主要内容 | 第21-24页 |
| 第二章 亮氨酸氨肽酶的克隆及克隆载体的构建 | 第24-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 亮氨酸氨肽酶CZ-lap的基因扩增 | 第25-27页 |
| 2.2.2 CZ-lap全长基因PCR产物的回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.3 克隆载体pMD18-T-LAP的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.4 质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.5 感受态的转化 | 第30页 |
| 2.2.6 亮氨酸氨肽酶基因的序列分析 | 第30-31页 |
| 2.3 结果讨论 | 第31-33页 |
| 2.3.1 CZ-lap基因片段的扩增 | 第31页 |
| 2.3.2 克隆载体pMD18-T-LAP的构建结果及鉴定 | 第31-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-36页 |
| 第三章 亮氨酸氨肽酶不同表达载体的构建及表达 | 第36-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第36-37页 |
| 3.1.2 培养基 | 第37页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-46页 |
| 3.2.1 pEASY-E2-LAP表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.2.2 pET22b-LAP表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.3 pEASY-E2-LAP及pET22b-LAP重组表达载体的表达 | 第42-43页 |
| 3.2.4 样品处理方法 | 第43-44页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| 3.2.6 氨肽酶活力测定 | 第45-46页 |
| 3.3 结果讨论 | 第46-52页 |
| 3.3.1 pEASY-E2-LAP表达载体的构建结果及鉴定 | 第46-48页 |
| 3.3.2 pET22b-LAP表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.3 pEASY-E2-LAP的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.4 pET22b-LAP的表达 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 表达条件优化及离子激活作用的研究 | 第54-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 菌种 | 第54页 |
| 4.1.2 试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 酶活力测定 | 第55页 |
| 4.2.2 离子激活作用的研究 | 第55-56页 |
| 4.2.3 表达条件初步优化 | 第56-57页 |
| 4.3 结果讨论 | 第57-62页 |
| 4.3.1 离子激活作用的影响 | 第57-59页 |
| 4.3.2 重组菌株表达条件优化的初步探索 | 第59-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第五章 蜡状芽孢杆菌CZ亮氨酸氨肽酶的分离纯化 | 第64-78页 |
| 5.1 实验材料 | 第64-67页 |
| 5.1.1 菌种 | 第64页 |
| 5.1.2 培养基 | 第64-65页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第65-66页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第66-67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-72页 |
| 5.2.1 发酵粗酶液的制备 | 第67页 |
| 5.2.2 酶活测定 | 第67页 |
| 5.2.3 蛋白质的含量测定 | 第67-68页 |
| 5.2.4 盐析 | 第68-69页 |
| 5.2.5 透析 | 第69-70页 |
| 5.2.6 凝胶过滤层析 | 第70页 |
| 5.2.7 离子交换层析 | 第70-71页 |
| 5.2.8 疏水层析 | 第71-72页 |
| 5.2.9 SDS-PAGE检测 | 第72页 |
| 5.3 结果讨论 | 第72-76页 |
| 5.3.1 凝胶过滤 | 第72页 |
| 5.3.2 离子交换层析 | 第72-73页 |
| 5.3.3 疏水层析 | 第73-75页 |
| 5.3.4 SDS-PAGE检测 | 第75-76页 |
| 5.4 本章小节 | 第76-78页 |
| 结论与展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录 | 第86-90页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92页 |
