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翻译延伸速率的全局测定及其生物学意义

中文摘要第3-4页
英文摘要第4页
第一章 引言第8-14页
    1.1 翻译:蛋白质的合成过程第8-9页
    1.2 翻译调控决定蛋白质组第9页
    1.3 翻译比率TR(Translation Ratio)反映翻译起始效率第9-10页
    1.4 测定翻译延伸速率是研究翻译调控中的一大难题第10页
    1.5 翻译速率的研究具有重要的生物学意义第10-11页
    1.6 传统的用于预测翻译速率的指标并不能有效的反映翻译延伸速率第11-12页
    1.7 翻译延伸速率调控的复杂性第12页
    1.8 利用高通量测序的方法来测量翻译延伸速率第12-13页
    1.9 新策略测定人细胞生理条件下全基因范围内单基因水平的相对翻译延伸速率第13-14页
第二章 材料与方法第14-32页
    2.1 实验材料第14页
    2.2 实验试剂第14-15页
    2.3 实验仪器第15页
    2.4 细胞培养第15-16页
    2.5 总RNA提取第16-17页
    2.6 核糖体新生肽链复合物的提取及正在翻译的mRNA提取第17-18页
    2.7 总mRNA与正在翻译的mRNA(RNC-mRNA)提取第18-19页
    2.8 总mRNA及正在翻译的mRNA(RNC-mRNA)的二代测序文库构建第19-23页
    2.9 通过多核糖体图谱分析( Polysome Profiling )实验摸索核糖体印记技术(Ribosome Profiling, Ribo-seq)的RNase酶切条件第23页
    2.10 核糖体足迹(Ribosome footprints, RFPs)的制备第23-24页
    2.11 RFP样品中的rRNA去除第24-26页
    2.12 RFP二代测序文库的构建第26-28页
    2.13 RNA测序第28-29页
    2.14 序列分析第29-30页
    2.15 Hotelling's T~2置信椭圆分析第30页
    2.16 密码子偏好性分析第30-31页
    2.17 基因的基因本体(Gene ontology, GO)富集分析第31页
    2.18 IPA分析第31-32页
第三章 结果第32-65页
    3.1 全局测定人细胞中单基因水平的相对翻译延伸速率的新策略第32-33页
    3.2 总mRNA和正在翻译的mRNA(RNC-mRNA)测序第33-34页
    3.3 RFP的制备与测序第34-37页
    3.4 测定四株细胞生理条件下全基因范围单基因水平的相对翻译延伸速率第37-48页
    3.5 Low-EVI基因具有翻译暂停位点以促进其蛋白质的折叠第48-51页
    3.6 导致low EVI基因翻译延伸速率慢的主要因素第51-59页
    3.7 肺癌细胞中翻译延伸速率的调控可能有利于细胞的恶性表型第59-65页
第四章 讨论第65-72页
    4.1 使用EVI来测量基因的翻译延伸速率的正确性第65-66页
    4.2 密码子偏好性可能是降低基因翻译延伸速率的主要原因第66-68页
    4.3 EVI调控在癌细胞中的生物学意义第68-69页
    4.4 翻译调控的二极化调控模式第69-70页
    4.5 本研究策略的局限性与应用潜力第70-72页
全文总结及创新性说明第72-73页
参考文献第73-78页
附录一:英文缩略语及中英文对照表第78-81页
附录二:生物素标记的探针序列第81-82页
附录三:四株细胞中宏基因的翻译起始分析第82-83页
    参考文献第82-83页
附录四:四株细胞的low-EVI基因及high-TR基因第83-93页
附录五:high-TR基因与low-EVI的RFP覆盖度图示例第93-95页
附录六:A549/HBE和H1299/HBE EVI下调10倍以上的基因第95-98页
在校期间发表的论文第98-99页
致谢第99页

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