| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-22页 |
| 1.1 红鳍东方鲀养殖相关研究概况 | 第9-11页 |
| 1.1.1 红鳍东方鲀营养价值 | 第9页 |
| 1.1.2 红鳍东方鲀的养殖状况 | 第9-11页 |
| 1.2 鱼类免疫系统 | 第11-14页 |
| 1.2.1 概述 | 第11页 |
| 1.2.2 鱼类的非特异性免疫 | 第11-12页 |
| 1.2.3 鱼类特异性免疫 | 第12页 |
| 1.2.4 非特异性免疫因子 | 第12-14页 |
| 1.3 鱼类白介素的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 白介素 1 | 第15页 |
| 1.3.2 白介素 2 | 第15-16页 |
| 1.3.3 白介素 15 | 第16页 |
| 1.4 重组表达系统 | 第16-21页 |
| 1.4.1 原核表达系统 | 第16-18页 |
| 1.4.2 真核表达系统 | 第18-21页 |
| 1.5 本研究的意义及目的 | 第21-22页 |
| 第二章 红鳍东方鲀白介素 2（IL-2）基因的原核表达 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 构建重组红鳍东方鲀IL-2原核表达载体 | 第22-23页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.3 重组表达载体的提取 | 第23页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 菌检 | 第24页 |
| 2.2.6 质粒的双酶切鉴定及测序 | 第24页 |
| 2.2.7 重组表达载体的诱导表达 | 第24-25页 |
| 2.2.8 重组蛋白可溶性分析 | 第25页 |
| 2.2.9 重组蛋白的纯化及western blot鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.10 重组蛋白的肠激酶酶切及酶切条件的优化 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.3.1 红鳍东方鲀IL-2基因序列分析及合成 | 第26-27页 |
| 2.3.2 原核表达载体的转化 | 第27-28页 |
| 2.3.3 菌检结果 | 第28页 |
| 2.3.4 重组质粒的双酶切鉴定及测序 | 第28-29页 |
| 2.3.5 重组蛋白可溶性分析 | 第29-30页 |
| 2.3.6 重组蛋白的分离纯化及Western Blot鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.7 肠激酶酶切条件优化 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 红鳍东方鲀白介素2（IL-2）基因的真核表达 | 第34-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 构建重组红鳍东方鲀IL-2真核表达载体 | 第34页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第34-35页 |
| 3.2.3 重组表达载体的提取 | 第35页 |
| 3.2.4 重组质粒的双酶切鉴定 | 第35页 |
| 3.2.5 重组质粒线性化 | 第35页 |
| 3.2.6 毕赤酵母GS115菌株感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 3.2.7 重组质粒的转化及高拷贝菌株的筛选 | 第36页 |
| 3.2.8 基因组DNA的提取及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.9 蛋白质诱导表达条件优化 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.3.1 重组质粒的双酶切鉴定 | 第38页 |
| 3.3.2 高拷贝菌株筛选 | 第38-39页 |
| 3.3.3 高拷贝菌株的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.4 重组蛋白诱导条件优化 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 重组红鳍东方鲀白介素2蛋白的活性鉴定及免疫应答 | 第43-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第43页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 4.2.1 重组蛋白的活性鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.3 重组蛋白体内免疫红鳍东方鲀 | 第44页 |
| 4.2.4 免疫后相关基因的表达 | 第44-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-54页 |
| 4.3.1 重组红鳍东方鲀白介素2的活性鉴定 | 第47-49页 |
| 4.3.2 红鳍东方鲀肾脏组织总RNA提取 | 第49-50页 |
| 4.3.3 免疫后肾脏组织中IL-2、IL-15、MHCI、STAT2基因的表达差异 | 第50-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-57页 |
| 4.4.1 重组白介素的活性鉴定 | 第54-55页 |
| 4.4.2 重组蛋白免疫鱼体后肾脏组织中相关基因的表达分析 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
