| 中文摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-16页 |
| 1.1 研究目的 | 第12页 |
| 1.2 目前肿瘤标志物研究中存在的问题 | 第12-13页 |
| 1.2.1 取材问题 | 第12-13页 |
| 1.2.2 应用适配子技术筛选肿瘤标志物时存在的靶细胞问题 | 第13页 |
| 1.3 SELEX技术、适配子-生物素-链酶亲和素磁珠提取膜蛋白技术 | 第13-16页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第16-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-22页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第16页 |
| 2.1.2 实验仪器和设备 | 第16-17页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.4 载体及主要试剂盒 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要试剂配制方法 | 第19-22页 |
| 2.1.6 ssDNA文库的设计与合成 | 第22页 |
| 2.1.7 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-39页 |
| 2.2.1 早期胃腺癌细胞提取与鉴定 | 第22-24页 |
| 2.2.2 通过cell-SELEX技术筛选特异性适配子 | 第24-29页 |
| 2.2.3 第12轮筛选产物ssDNA文库PCR扩增与纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.4 适配子的克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.5 克隆菌测序 | 第31页 |
| 2.2.6 适配子一级结构分析及二级结构预测 | 第31页 |
| 2.2.7 适配子特异性和亲和力分析 | 第31-34页 |
| 2.2.8 早期胃腺癌细胞靶膜蛋白的制备 | 第34-36页 |
| 2.2.9 目标靶蛋白Maldi-TOF-TOF质谱鉴定分析及NCBI数据库检索分析 | 第36页 |
| 2.2.10 新标志物EGA7检测方法的建立及检测分析 | 第36-38页 |
| 2.2.11 血清源标志物EGA12的检测及SDS-PAGE鉴定 | 第38-39页 |
| 第三章 实验结果 | 第39-65页 |
| 3.1 组织细胞分离结果 | 第39-40页 |
| 3.2 筛选高特异性高亲和力适配子 | 第40-43页 |
| 3.2.1 早期胃腺癌细胞适配子筛选过程 | 第40-41页 |
| 3.2.2 测定每轮ssDNA与早期胃腺癌细胞结合的荧光强度值及计算结合率 | 第41-42页 |
| 3.2.3 各轮筛选得到ssDNA文库进行PCR扩增结果 | 第42页 |
| 3.2.4 链酶亲和素磁珠分离制备ssDNA文库 | 第42-43页 |
| 3.3 适配子克隆测序及二级结构分析 | 第43-55页 |
| 3.3.1 适配子序列表及一级结构同源性分析 | 第43-49页 |
| 3.3.2 适配子二级结构预测 | 第49-55页 |
| 3.4 适配子特异性和亲和力分析结果 | 第55-56页 |
| 3.4.1 适配子PCR扩增 | 第55页 |
| 3.4.2 适配子特异性分析 | 第55-56页 |
| 3.4.3 适配子亲和力分析 | 第56页 |
| 3.5 目标靶蛋白纯度鉴定 | 第56-58页 |
| 3.5.1 光谱法鉴定分析 | 第56-57页 |
| 3.5.2 SDS-PAGE鉴定分析 | 第57-58页 |
| 3.6 目标靶蛋白质谱鉴定及NCBI数据库检索对比分析 | 第58-60页 |
| 3.7 早期胃腺癌新标志物EGA7检测方法的建立及方法学评价 | 第60-63页 |
| 3.7.1 检测方法建立 | 第60页 |
| 3.7.2 变异系数计算(重复性试验) | 第60-61页 |
| 3.7.3 检测灵敏度 | 第61页 |
| 3.7.4 检测试剂适配子浓度的确立 | 第61-62页 |
| 3.7.5 检测分析 | 第62-63页 |
| 3.8 血清源标志物EGA12的检测及SDS-PAGE鉴定 | 第63-65页 |
| 3.8.1 血清源标志物EGA12的检测 | 第63-64页 |
| 3.8.2 血清源EGA12 SDS-PAGE鉴定结果 | 第64-65页 |
| 讨论 | 第65-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 在校期间研究成果 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 缩略词表 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
