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家蚕ovo及otu基因的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-13页
引言第13-15页
第一章 文献综述第15-36页
 1 昆虫的卵子发生第15-25页
   ·果蝇卵子发生第15-21页
     ·果蝇卵子发生的基本过程第15页
     ·原卵区第15-16页
     ·干细胞第16-17页
     ·卵室的分裂和极化第17-18页
     ·卵母细胞的极化第18-19页
     ·细胞骨架极性和RNA 定位第19-20页
     ·极质第20页
     ·上皮细胞极性和形态发生第20-21页
   ·蜜蜂卵子发生第21-24页
     ·蜜蜂卵子发生的基本过程第21页
     ·不同级型的蜜蜂产卵力有显著差异第21-22页
     ·蜜蜂卵子发生的起始区很可能在端丝而非原卵区第22-23页
     ·处女蜂王和有王工蜂卵子发生的起始期没有受到抑制第23页
     ·卵黄生成素参与保育工蜂的社会行为第23-24页
   ·家蚕的卵子发生第24-25页
 2 与果蝇卵巢发育相关基因的研究第25-28页
   ·ovo 基因的研究第25-27页
     ·果蝇ovo 基因的结构、转录及表达调控第25页
     ·OVO 蛋白家族的结构及功能第25-27页
   ·卵巢肿瘤(ovarian tumor gene, otu)基因的研究第27-28页
     ·果蝇otu 基因的结构及转录第27页
     ·Otu 蛋白的结构及功能第27-28页
 参考文献第28-36页
第二章 研究目的与研究内容第36-40页
 1 研究的目的和意义第36-37页
 2 研究的主要内容第37-38页
   ·家蚕ovo 基因的克隆、鉴定及表达分析第37页
   ·上调和下调家蚕ovo 基因表达对生殖腺发育的影响第37页
   ·家蚕otu 基因及其可变剪接第37-38页
 3 技术路线第38-40页
   ·家蚕ovo 基因研究的技术路线第38-39页
   ·家蚕otu 基因研究的技术路线第39-40页
第三章 实验材料与方法第40-56页
 1 实验材料第40-45页
   ·载体与菌种第40页
   ·生物材料第40页
   ·工具酶及试剂盒第40页
   ·其它试剂第40-41页
   ·主要实验试剂与配制第41-45页
 2 常用仪器第45-46页
 3 试验常用方法第46-54页
   ·感受态细胞的制备第46页
   ·DNA 的连接反应体系第46页
   ·连接产物的转化第46-47页
   ·重组质粒的筛选第47页
   ·碱裂解法少量制备质粒DNA第47-48页
   ·DNA 的酶切反应体系第48页
   ·基因组DNA 提取第48-49页
   ·目的片段的分离和回收第49页
   ·PCR 扩增目的片段第49-50页
   ·琼脂糖凝胶电泳第50页
   ·SDS-PAGE 蛋白质电泳第50页
   ·SDS-PAGE 凝胶的染色和脱色第50页
   ·Western blotting第50-52页
   ·过柱纯化蛋白第52页
   ·免疫小鼠,制备多克隆抗体第52-53页
   ·总RNA 提取第53页
   ·RNA 反转录成cDNA第53页
   ·细胞的培养和保存第53-54页
   ·实时定量PCR(Real-Time PCR)第54页
   ·碱性磷酸酶(CIAP)处理载体第54页
 参考文献第54-56页
第四章 家蚕ovo 基因的克隆、鉴定及表达谱分析第56-90页
 1 材料与方法第57-61页
   ·材料与试剂第57-58页
   ·实验方法第58-61页
 2 结果与分析第61-82页
   ·Bmovo 的电子克隆第61页
   ·Bmovo ORF 的克隆与序列测定第61-65页
   ·BmOVO 的高级结构分析第65-67页
   ·BmOVO 的信号肽序列分析第67页
   ·BmOVO 的同源性比较与进化分析第67-68页
   ·Bmovo 表达谱分析第68-74页
   ·Bmovo 重组表达载体的克隆与鉴定第74-79页
   ·BmOVO-1 重组蛋白的表达和纯化第79-80页
   ·Western Blotting 检测BmOVO-1 多克隆抗体第80页
   ·家蚕主要组织Western blotting 检测第80-81页
   ·BmOVO 的细胞定位第81-82页
 3 讨论第82-86页
   ·BmOVO 的不同亚型是具有不同活性的转录因子第82-84页
   ·Bmovo-2 是否表达第84-85页
   ·BmOVO 潜在的功能第85-86页
 参考文献第86-90页
第五章 家蚕ovo 基因表达上调、下调对家蚕性状的影响第90-103页
 1 材料与方法第91-93页
   ·材料与试剂第91页
   ·实验方法第91-93页
 2 结果与分析第93-100页
   ·下调Bmovo 水平对雌蚕造卵数的影响第93-95页
   ·注射Bmovo-dsRNA 对蚕茧产量的影响第95页
   ·转基因载体的构建与鉴定第95-98页
   ·转基因家蚕的筛选与鉴定第98-100页
 3 讨论第100-102页
   ·BmOVO 可能参与家蚕卵子的形成第100-101页
   ·下调 Bmovo 水平对雌蚕雄蚕产丝量的影响第101-102页
 参考文献第102-103页
第六章 家蚕otu 基因及其可变剪接第103-116页
 1 材料与方法第104-106页
   ·材料第104-105页
   ·RNA 提取及cDNA 制备第105页
   ·Bmotu 的克隆第105页
   ·生物信息学分析第105页
   ·系统进化分析第105-106页
   ·表达谱分析第106页
 2 结果与分析第106-111页
   ·Bmotu 基因的cDNA 克隆与序列测定第106-107页
   ·Bmotu 基因及其推导的氨基酸序列分析第107-108页
   ·Bmotu 基因的基因组分析第108页
   ·Bmotu 基因的组织表达谱第108-109页
   ·BmOtu 同源比对与进化分析第109-111页
 3 讨论第111-112页
 参考文献第112-116页
结论第116-117页
在校期间发表论文情况第117-118页
附录第118-125页
致谢第125-127页

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