| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 次级代谢产物的研究 | 第13-14页 |
| 1.1.1 微生物的次级代谢产物 | 第13-14页 |
| 1.1.2 丝状真菌的次级代谢产物 | 第14页 |
| 1.2 粗糙脉孢菌研究现状 | 第14-17页 |
| 1.2.1 粗糙脉孢菌概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 粗糙脉孢菌的组成性毒素 | 第15-16页 |
| 1.2.3 粗糙脉孢菌解毒机制推测 | 第16-17页 |
| 1.3 以构巢曲霉作为异源表达菌株的优势 | 第17页 |
| 1.3.1 构巢曲霉概述 | 第17页 |
| 1.3.2 构巢曲霉遗传操作体系的优势 | 第17页 |
| 1.4 抗体研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 研究方法 | 第18-19页 |
| 1.5.1 粗糙脉孢菌的电转化 | 第18页 |
| 1.5.2 TLC检测次级代谢产物 | 第18-19页 |
| 1.5.3 HPLC检测次级代谢产物 | 第19页 |
| 1.6 本课题的研究意义 | 第19-21页 |
| 2 粗糙脉孢菌突变菌株的构建及代谢产物的初步研究 | 第21-39页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基及相关试剂配方 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 基因片段的获取 | 第23-29页 |
| 2.3 电转化获得突变菌株 | 第29-31页 |
| 2.3.1 粗糙脉孢菌电转化 | 第29-30页 |
| 2.3.2 转化子鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 突变菌株代谢产物的分析 | 第31-32页 |
| 2.4.1 突变菌株的培养 | 第31页 |
| 2.4.2 提取代谢产物 | 第31页 |
| 2.4.3 TLC分析 | 第31-32页 |
| 2.5 实验结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.5.1 粗糙脉孢菌gDNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.5.2 目的基因的克隆（一轮） | 第33页 |
| 2.5.3 目的基因的克隆（三轮） | 第33-34页 |
| 2.5.4 转化子生长表型 | 第34-35页 |
| 2.5.5 转化子PCR检测鉴定 | 第35页 |
| 2.5.6 TLC检测次级代谢产物 | 第35-37页 |
| 2.5.7 HPLC检测次级代谢产物 | 第37页 |
| 2.6 讨论与分析 | 第37-38页 |
| 2.7 本章小结 | 第38-39页 |
| 3 粗糙脉孢菌PKS5在构巢曲霉中的异源表达 | 第39-59页 |
| 3.1 材料 | 第39-43页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 3.1.4 培养基配方 | 第40-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-49页 |
| 3.2.1 重组载体的构建 | 第43-47页 |
| 3.2.2 pYH-WA-pyrG-KI+PKS5重组质粒的线性化 | 第47页 |
| 3.2.3 构巢曲霉原生质体制备 | 第47-48页 |
| 3.2.4 PKS5重组质粒与空质粒转化构巢曲霉 | 第48页 |
| 3.2.5 转化子PCR检测 | 第48-49页 |
| 3.3 检测PKS5在构巢曲霉中的表达 | 第49-50页 |
| 3.3.1 TLC检测PKS5在构巢曲霉中的表达 | 第49-50页 |
| 3.3.2 HPLC检测PKS5在构巢曲霉中的表达 | 第50页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第50-56页 |
| 3.4.1 pYH-WA-pyrG-KI载体电泳图谱 | 第50页 |
| 3.4.2 pYH-WA-pyrG-KI载体单酶切电泳检测 | 第50-51页 |
| 3.4.3 PKS5基因克隆 | 第51-52页 |
| 3.4.4 重组载体的构建 | 第52页 |
| 3.4.5 重组载体的PCR检测 | 第52-53页 |
| 3.4.6 重组载体的线性化 | 第53-54页 |
| 3.4.7 构巢曲霉菌株的准备 | 第54页 |
| 3.4.8 转化子表型鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.9 转化子的PCR检测 | 第55页 |
| 3.4.10 TLC检测次级代谢产物 | 第55-56页 |
| 3.4.11 HPLC检测次级代谢产物 | 第56页 |
| 3.5 讨论与分析 | 第56-57页 |
| 3.6 本章小结 | 第57-59页 |
| 4 TF蛋白的体外表达及抗体的制备 | 第59-73页 |
| 4.1 材料 | 第59-61页 |
| 4.1.1 菌株、动物及质粒 | 第59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 4.1.4 相关试剂配方 | 第60-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-65页 |
| 4.2.1 重组载体的构建 | 第61-64页 |
| 4.2.2 融合蛋白载体的转化 | 第64页 |
| 4.2.3 融合蛋白的诱导 | 第64-65页 |
| 4.2.4 融合蛋白的纯化 | 第65页 |
| 4.3 抗体的制备 | 第65-67页 |
| 4.3.1 实验兔的准备 | 第65-66页 |
| 4.3.2 抗体制备方法 | 第66页 |
| 4.3.3 免疫操作方法 | 第66页 |
| 4.3.4 静脉取血技巧 | 第66页 |
| 4.3.5 心脏取血技巧 | 第66-67页 |
| 4.3.6 血液处理 | 第67页 |
| 4.3.7 免疫过程 | 第67页 |
| 4.4 结果与分析 | 第67-70页 |
| 4.4.1 TF基因的克隆 | 第67-68页 |
| 4.4.2 质粒的双酶切与电泳检测 | 第68-69页 |
| 4.4.3 重组载体的检测 | 第69页 |
| 4.4.4 重组载体的蛋白表达 | 第69-70页 |
| 4.5 讨论与分析 | 第70-71页 |
| 4.6 本章小结 | 第71-73页 |
| 5 构建TF原位超强表达菌株及代谢产物的检测 | 第73-91页 |
| 5.1 材料 | 第73-75页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第73-74页 |
| 5.1.2 培养基配方 | 第74页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第74页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第74页 |
| 5.1.5 相关试剂配制 | 第74-75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-81页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第75-77页 |
| 5.2.2 目的基因的扩增 | 第77-80页 |
| 5.2.3 菌株的准备 | 第80页 |
| 5.2.4 电转化 | 第80页 |
| 5.2.5 转化子的培养 | 第80页 |
| 5.2.6 转化子的鉴定 | 第80-81页 |
| 5.3 Western Blot检测TF表达水平 | 第81-85页 |
| 5.3.1 菌株的培养 | 第81页 |
| 5.3.2 蛋白质的提取 | 第81-82页 |
| 5.3.3 蛋白胶的配制 | 第82-83页 |
| 5.3.4 蛋白电泳 | 第83页 |
| 5.3.5 蛋白胶转膜 | 第83-85页 |
| 5.4 TLC检测次级代谢产物 | 第85-86页 |
| 5.5 结果与分析 | 第86-89页 |
| 5.5.1 目的片段的扩增 | 第86页 |
| 5.5.2 Double joint PCR连接片段 | 第86-87页 |
| 5.5.3 Single joint PCR连接片段 | 第87-88页 |
| 5.5.4 转化子PCR鉴定 | 第88页 |
| 5.5.5 Western Blot检测 | 第88-89页 |
| 5.5.6 TLC检测次级代谢产物 | 第89页 |
| 5.6 讨论与分析 | 第89-90页 |
| 5.7 本章小结 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 作者简历 | 第101-103页 |
| 学位论文数据集 | 第103页 |
