| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第14-16页 |
| 2 文献综述 | 第16-24页 |
| 2.1 乳腺泌乳研究进展 | 第16-18页 |
| 2.1.1 泌乳及其调节 | 第16页 |
| 2.1.2 乳蛋白的组成及功能 | 第16-18页 |
| 2.1.3 乳蛋白合成及调控 | 第18页 |
| 2.2 mTOR信号通路研究进展 | 第18-22页 |
| 2.2.1 mTOR信号通路概述 | 第18-20页 |
| 2.2.2 mTOR上游信号通路 | 第20-21页 |
| 2.2.3 mTOR下游信号通路 | 第21-22页 |
| 2.3 氨基酸与mTOR信号通路的调控 | 第22页 |
| 2.4 G蛋白偶联受体T1R1/T1R3及对mTOR信号通路的调控 | 第22-24页 |
| 2.4.1 G蛋白偶联受体 | 第22-23页 |
| 2.4.2 T1R1/T1R3与氨基酸的感知及mTOR信号通路的调控 | 第23-24页 |
| 3 T1R1/T1R3对小鼠乳腺上皮细胞系HC11细胞氨基酸的感知和乳蛋白的合成调控机制研究 | 第24-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 3.1.1 实验样品 | 第24页 |
| 3.1.2 细胞培养及处理 | 第24-25页 |
| 3.1.3 实验所用试剂 | 第25-26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-30页 |
| 3.2.1 RNA干涉 | 第26页 |
| 3.2.2 不同抑制处理 | 第26-27页 |
| 3.2.3 细胞总RNA提取及反转录 | 第27-28页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR（qPCR） | 第28-29页 |
| 3.2.5 Western blot | 第29页 |
| 3.2.6 氨基酸浓度分析 | 第29-30页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第30页 |
| 3.3 结果分析 | 第30-36页 |
| 3.3.1 T1R1与T1R3在HC11细胞中的表达情况分析 | 第30页 |
| 3.3.2 干涉T1R1对 β-casein的影响分析 | 第30-33页 |
| 3.3.3 沉默T1R1对mTOR的影响 | 第33-34页 |
| 3.3.4 抑制T1R1对氨基酸转运蛋白的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.5 沉默T1R1和抑制氨基酸转运蛋白对mTOR信号通路的作用 | 第35页 |
| 3.3.6 沉默T1R1对HC11细胞内氨基酸浓度的影响 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 4 T1R1/T1R3对小鼠乳腺组织不同时期乳蛋白合成的调控机制研究 | 第38-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第38-39页 |
| 4.1.2 实验设计 | 第39页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第39页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第39-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 4.2.1 小鼠基因分型 | 第40-42页 |
| 4.2.2 实验小鼠样品采集 | 第42页 |
| 4.2.3 冰冻切片及免疫荧光（Immunofluorescence） | 第42页 |
| 4.2.4 泌乳量测定 | 第42-43页 |
| 4.2.5 RNA提取及反转录 | 第43页 |
| 4.2.6 实时荧光定量PCR | 第43页 |
| 4.2.7 Western blot | 第43页 |
| 4.2.8 数据处理 | 第43-44页 |
| 4.3 结果分析 | 第44-52页 |
| 4.3.1 鼠尾DNA质量检测 | 第44页 |
| 4.3.2 小鼠基因分型 | 第44-45页 |
| 4.3.3 小鼠乳腺组织中T1R1与T1R3的表达情况分析结果 | 第45-46页 |
| 4.3.4 qPCR及Western blot分析T1R1在小鼠乳腺上皮细胞中的表达情况 | 第46-47页 |
| 4.3.5 T1R1敲除小鼠与野生型小鼠泌乳量测定结果 | 第47页 |
| 4.3.6 β-酪蛋白合成检测 | 第47-48页 |
| 4.3.7 敲除T1R1对mTOR信号通路的影响分析结果 | 第48-51页 |
| 4.3.8 敲除T1R1对氨基酸转运蛋白的影响分析结果 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 5 T1R3对T1R1 KO及WT小鼠mTOR信号通路的调控分析 | 第54-60页 |
| 5.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第54页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第54-55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 5.2.1 外植体的准备 | 第55页 |
| 5.2.2 外植体的培养及处理 | 第55页 |
| 5.2.3 Western blot | 第55-56页 |
| 5.2.4 数据处理 | 第56页 |
| 5.3 结果分析 | 第56-58页 |
| 5.3.1 T1R3在小鼠乳腺中的表达分析 | 第56-57页 |
| 5.3.2 抑制T1R3对T1R1 KO及WT小鼠mTOR信号通路的影响 | 第57-58页 |
| 5.4 讨论 | 第58页 |
| 5.5 小结 | 第58-60页 |
| 6 结论与创新点 | 第60-62页 |
| 6.1 结论 | 第60页 |
| 6.2 创新点 | 第60页 |
| 6.3 展望 | 第60-62页 |
| 附录 | 第62-72页 |
| 附录1 主要实验仪器及试剂 | 第62-63页 |
| 1.1 主要实验仪器 | 第62页 |
| 1.2 试剂 | 第62页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第62-63页 |
| 附录2 细胞及组织总RNA的提取 | 第63-64页 |
| 2.1 总RNA提取步骤 | 第63页 |
| 2.2 总RNA质量分析 | 第63-64页 |
| 2.3 总RNA浓度测定 | 第64页 |
| 附录3 Western blot实验 | 第64-68页 |
| 3.1 Western blot相关试剂配制 | 第64-65页 |
| 3.2 BCA定量 | 第65页 |
| 3.3 Western blot实验步骤 | 第65-68页 |
| 附录4 冰冻切片及免疫荧光 | 第68-69页 |
| 4.1 冰冻切片 | 第68-69页 |
| 4.2 免疫荧光（双标） | 第69页 |
| 附录5 pMD 19-T基因克隆转化实验 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 作者简历 | 第84-86页 |
| 学位论文数据集 | 第86页 |
