| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 腈水解酶在工业生物催化上的应用 | 第12-15页 |
| 1.1.1 腈水解酶简介 | 第12页 |
| 1.1.2 腈水解酶结构与催化特性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 影响腈水解酶活性的因素 | 第13-14页 |
| 1.1.4 腈水解酶在扁桃酸生产中的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 自聚集短肽 | 第15-16页 |
| 1.2.1 自聚集短肽简介 | 第15页 |
| 1.2.2 自组装短肽在生物催化中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 固定化酶 | 第16-18页 |
| 1.3.1 酶固定化技术 | 第16-17页 |
| 1.3.2 固定化酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 论文研究内容及意义 | 第18-21页 |
| 1.4.1 研究背景及意义 | 第18-19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 自聚集短肽诱导腈水解酶聚集体在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化 | 第21-44页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第21-26页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.4 常用溶液及培养基配制 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.3.1 pET-Nit-R18A、pET-Nit-ELK16、pET-Nit-L6KD表达载体的构建 | 第26-30页 |
| 2.3.2 E.coli化学法转化感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.3 pET-Nit-R18A、pET-Nit-ELK16、pET-Nit-L6KD转化至E.coli DH5α | 第31页 |
| 2.3.4 重组质粒pET-Nit-R18A、pET-Nit-ELK16、pET-Nit-L6KD的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.5 将得到的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3) | 第31-32页 |
| 2.3.6 重组腈水解酶在E.coli BL21(DE3)中的表达与分析 | 第32-33页 |
| 2.3.7 腈水解酶的纯化方法 | 第33-35页 |
| 2.3.8 蛋白浓度的测定 | 第35页 |
| 2.3.9 腈水解酶的酶活测定 | 第35-37页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第37-43页 |
| 2.4.1 pET-Nit-R18A、pET-Nit-ELK16、pET-Nit-L6KD载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.2 游离腈水解酶以及酶聚集体的诱导表达分析 | 第38-40页 |
| 2.4.3 游离腈水解酶及酶聚集体的纯化和酶活检测 | 第40-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 自聚集短肽诱导腈水解酶的结构性质研究 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第45页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.3.1 保存时间对酶的影响 | 第46页 |
| 3.3.2 腈水解酶动力学参数的对比 | 第46页 |
| 3.3.3 透射电镜及冷冻透射电镜样品处理与分析 | 第46-47页 |
| 3.3.4 FTIR结构分析 | 第47页 |
| 3.3.5 硫黄素T（Th-T）染色 | 第47页 |
| 3.3.6 蛋白酶K对腈水解酶聚集体的降解 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-55页 |
| 3.4.1 酶动力学参数 | 第48页 |
| 3.4.2 放置一个月前后样品对比 | 第48-50页 |
| 3.4.3 透射电子显微镜观察 | 第50-51页 |
| 3.4.4 腈水解酶聚集体的二级结构 | 第51-53页 |
| 3.4.5 蛋白酶K鉴定腈水解酶聚集体是否为包涵体 | 第53-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 不同自聚集短肽诱导腈水解酶的酶学性质表征及对比 | 第56-65页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第56-57页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-58页 |
| 4.3.1 腈水解酶的固定化 | 第57页 |
| 4.3.2 最适反应温度和pH | 第57页 |
| 4.3.3 温度稳定性 | 第57-58页 |
| 4.3.4 底物耐受性 | 第58页 |
| 4.3.5 重复批次反应生产扁桃酸 | 第58页 |
| 4.4 实验结果 | 第58-63页 |
| 4.4.1 不同腈水解酶固定化回收率的对比 | 第58-59页 |
| 4.4.2 最适反应温度和pH | 第59-60页 |
| 4.4.3 温度稳定性 | 第60-61页 |
| 4.4.4 底物耐受性 | 第61-62页 |
| 4.4.5 连续批次生产R-扁桃酸 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 结论与展望 | 第65-67页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附表 | 第76页 |
