| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-26页 |
| 1.1 microRNA简介 | 第10-17页 |
| 1.1.1 microRNA的作用方式与功能 | 第10页 |
| 1.1.2 microRNA的发现 | 第10-11页 |
| 1.1.3 microRNA的来源 | 第11页 |
| 1.1.4 microRNA的转录 | 第11页 |
| 1.1.5 microRNA的加工 | 第11-13页 |
| 1.1.6 The RNA-induced silencing complex( RISC) | 第13-14页 |
| 1.1.7 microRNA的代谢更新 | 第14页 |
| 1.1.8 MicroRNA的进化 | 第14-15页 |
| 1.1.9 microRNA与疾病 | 第15-16页 |
| 1.1.10 microRNA与应激反应 | 第16-17页 |
| 1.2 内质网应激介绍 | 第17-23页 |
| 1.2.1 内质网应激(ER Stress) | 第17页 |
| 1.2.2 蛋白质折叠和质量监控 | 第17-18页 |
| 1.2.3 未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR) | 第18页 |
| 1.2.4 未折叠蛋白反应(UPR)的3条主要信号通路 | 第18-20页 |
| 1.2.5 ER Stress与人类疾病 | 第20-22页 |
| 1.2.6 ER Stress状态下,precursor microRNA的新型切割 | 第22-23页 |
| 1.3 DDX3X蛋白简介 | 第23-26页 |
| 1.3.1 DEAD Box Family | 第23页 |
| 1.3.2 DDX3X蛋白 | 第23-26页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第26-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验耗材和仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.2 实验试剂及配制 | 第26-27页 |
| 2.1.3 生物材料 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 细胞的复苏 | 第28页 |
| 2.2.2 细胞的传代 | 第28-29页 |
| 2.2.3 细胞的冻存 | 第29页 |
| 2.2.4 总RNA的抽提 | 第29页 |
| 2.2.5 DNase消化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 反转录 | 第30-32页 |
| 2.2.7 qPCR | 第32页 |
| 2.2.8 细胞转染 | 第32-33页 |
| 2.2.9 免疫共沉淀( Co-Immunopreciptation,co-IP) | 第33-34页 |
| 2.2.10 Western blot | 第34页 |
| 2.2.11 跑SDS-PAGE胶,银染显色 | 第34-35页 |
| 2.2.12 质粒构建 | 第35-37页 |
| 2.2.13 萤光素酶检测 | 第37-38页 |
| 2.2.14 加药诱导细胞进入ER Stress状态 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-56页 |
| 3.1 测序结果 | 第40-41页 |
| 3.2 qPCR验证加药处理后microRNA的表达变化 | 第41-42页 |
| 3.3 检测参与microRNA加工的基因是否受ER Stress影响 | 第42-44页 |
| 3.4 三种microRNA在ER Stress中的作用 | 第44-46页 |
| 3.5 co-IP ofAgo2检测可能在ER Stress状态下参与microRNA调控的未知蛋白 | 第46-47页 |
| 3.6 Western Blot检测DDX3X在ER Stress状态下的蛋白表达 | 第47-48页 |
| 3.7 Ago2 co-IP,western blot检测DDX3X和Ago2的相互作用 | 第48页 |
| 3.8 qPCR检测DDX3X对microRNA表达量的影响 | 第48-51页 |
| 3.8.1 下调DDX3X表达量,qPCR检测microRNA的表达量 | 第48-49页 |
| 3.8.2 上调DDX3X表达量,qPCR检测microRNA的表达量 | 第49-51页 |
| 3.9 DDX3X对miR-221和miR-452的primary和precursor表达量的影响 | 第51-52页 |
| 3.10 有关Gas-5在ER Stress状态下的表达变化 | 第52-56页 |
| 第四章 小结与讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 小结 | 第56-57页 |
| 4.2 microRNA与ER Stress | 第57-59页 |
| 4.3 DDX3X对microRNA的调控 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录Ⅰ | 第66-67页 |
| 附录Ⅱ | 第67-69页 |
| 附录Ⅲ | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 在审论文 | 第74页 |
