| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 阿托伐他汀钙的合成 | 第13-18页 |
| 1.1.1 阿托伐他汀钙 | 第13页 |
| 1.1.2 阿托伐他汀钙的合成 | 第13-15页 |
| 1.1.3 ATS-7的生物不对称合成研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2 羰基还原酶概述 | 第18-20页 |
| 1.2.1 羰基还原酶的分类 | 第18页 |
| 1.2.2 羰基还原酶的催化机理 | 第18-19页 |
| 1.2.3 羰基还原酶的来源及应用 | 第19页 |
| 1.2.4 羰基还原酶的筛选 | 第19-20页 |
| 1.3 辅酶再生循环 | 第20-22页 |
| 1.4 本课题的研究思路及主要内容 | 第22-23页 |
| 第二章 不对称还原CDOH氧化还原酶的筛选 | 第23-39页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第23-27页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 实验试剂与药品 | 第23-24页 |
| 2.2.3 培养基和试剂配制 | 第24-26页 |
| 2.2.4 实验仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 羰基还原酶基因的获得 | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的构建 | 第28页 |
| 2.3.3 转化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 重组菌的验证及诱导表达 | 第29页 |
| 2.3.5 超声波破碎 | 第29页 |
| 2.3.6 蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| 2.4 分析方法 | 第30-32页 |
| 2.4.1 酶活的测定 | 第30页 |
| 2.4.2 分析方法 | 第30-32页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第32-38页 |
| 2.5.1 羰基还原酶酶库的建立 | 第32-34页 |
| 2.5.2 重组菌的构建 | 第34-35页 |
| 2.5.3 重组菌的异源表达情况 | 第35-37页 |
| 2.5.4 不对称还原CDOH羰基还原酶筛选 | 第37-38页 |
| 2.6 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 不对称还原ATS-6氧化还原酶的筛选 | 第39-46页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第39页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第39页 |
| 3.2.2 实验试剂与药品 | 第39页 |
| 3.2.3 试剂配制 | 第39页 |
| 3.2.4 实验仪器与设备 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.3.1 不对称还原ATS-6羰基还原酶基因的获得 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组表达质粒的获得 | 第40页 |
| 3.3.3 转化 | 第40页 |
| 3.3.4 重组菌的验证及诱导表达 | 第40页 |
| 3.3.5 超声波破碎 | 第40页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第40页 |
| 3.4 分析方法 | 第40-42页 |
| 3.4.1 高效液相色谱检测 | 第40-41页 |
| 3.4.2 酶活的测定 | 第41-42页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第42-45页 |
| 3.5.1 不对称还原ATS-6的羰基还原酶酶库构建 | 第42-43页 |
| 3.5.2 重组菌的构建 | 第43页 |
| 3.5.3 重组菌的异源表达情况 | 第43-44页 |
| 3.5.4 不对称还原ATS-6氧化还原酶的筛选 | 第44-45页 |
| 3.6 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 醛酮还原酶SCAKR酶学性质研究及发酵条件优化 | 第46-62页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第46-47页 |
| 4.2.1 实验试剂与药品 | 第46页 |
| 4.2.2 试剂配制 | 第46-47页 |
| 4.2.3 实验仪器与设备 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.3.1 氧化还原酶的分离纯化 | 第47-48页 |
| 4.3.2 氧化还原酶蛋白浓度的测定 | 第48页 |
| 4.3.3 重组醛酮还原酶SCAKR酶学性质分析 | 第48-49页 |
| 4.3.4 重组醛酮还原酶SCAKR的发酵条件优化 | 第49-50页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第50-61页 |
| 4.4.1 SCAKR的纯化 | 第50页 |
| 4.4.2 SCAKR的序列分析 | 第50-51页 |
| 4.4.3 SCAKR的酶学性质研究 | 第51-53页 |
| 4.4.4 SCAKR发酵条件优化 | 第53-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 辅酶再生系统的构建 | 第62-73页 |
| 5.1 引言 | 第62-63页 |
| 5.2 实验材料与设备 | 第63页 |
| 5.2.1 菌种与质粒 | 第63页 |
| 5.2.2 实验试剂与药品 | 第63页 |
| 5.2.3 试剂配制 | 第63页 |
| 5.2.4 实验仪器与设备 | 第63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-67页 |
| 5.3.1 重组质粒pETDuet-gdh的构建 | 第63页 |
| 5.3.2 单菌单质粒共表达系统的构建 | 第63-66页 |
| 5.3.3 单菌双质粒共表达系统的构建 | 第66页 |
| 5.3.4 转化与诱导表达 | 第66页 |
| 5.3.5 重组菌催化不对称还原反应 | 第66-67页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第67-72页 |
| 5.4.1 重组菌E.coli BL21(DE3)/pETDuet-gdh表达情况 | 第67页 |
| 5.4.2 单菌单质粒共表达系统的蛋白表达情况 | 第67-70页 |
| 5.4.3 单菌双质粒共表达系统的蛋白表达情况 | 第70页 |
| 5.4.4 辅酶再生策略的比较 | 第70-72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 结论 | 第73-74页 |
| 6.2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录Ⅰ 本论文涉及的核酸序列 | 第83-93页 |
| 附录Ⅱ 本论文涉及的氨基酸序列 | 第93-97页 |
| 作者简介 | 第97页 |
