| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 抗体的结构及功能 | 第12-13页 |
| 1.2 抗体多样性产生的分子机制 | 第13-14页 |
| 1.3 骆驼抗体 | 第14-17页 |
| 1.3.1 骆驼重链抗体的发现及其特点 | 第14页 |
| 1.3.2 重链抗体的特点 | 第14-15页 |
| 1.3.3 重链抗体的分离及单域抗体的制备 | 第15页 |
| 1.3.4 单域抗体的应用 | 第15-17页 |
| 1.4 噬菌体抗体库的应用研究 | 第17-20页 |
| 1.4.1 抗体库 | 第17-18页 |
| 1.4.2 抗体库技术 | 第18-19页 |
| 1.4.3 噬菌体抗体库 | 第19-20页 |
| 1.5 试验目的与意义 | 第20-21页 |
| 2. 试验一 双峰驼天然单域抗体库的构建及初步鉴定 | 第21-37页 |
| 2.1 技术路线 | 第21-22页 |
| 2.2 试验材料和仪器 | 第22-25页 |
| 2.2.1 双峰驼抗凝全血 | 第22页 |
| 2.2.2 主要试剂及耗材 | 第22页 |
| 2.2.3 引物序列 | 第22页 |
| 2.2.4 培养基及溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.2.5 主要试验仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 试验方法 | 第25-30页 |
| 2.3.1 外周血淋巴细胞的分离 | 第25页 |
| 2.3.2 淋巴细胞总RNA提取及cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.3.3 VHH基因扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.4 用SfiI和NotI对VHH片段进行双酶切 | 第27页 |
| 2.3.5 噬菌体载体pCANTAB5E的制备 | 第27-29页 |
| 2.3.6 VHH片段与噬菌体载体pCANTAB5E连接 | 第29页 |
| 2.3.7 转化感受态E.coli TG1细胞 | 第29-30页 |
| 2.3.8 抗体库的初步鉴定 | 第30页 |
| 2.4 结果 | 第30-35页 |
| 2.4.1 第一轮PCR电泳结果 | 第30-31页 |
| 2.4.2 第二轮PCR电泳结果 | 第31-32页 |
| 2.4.3 第三轮PCR电泳结果 | 第32页 |
| 2.4.4 pCANTAB5E质粒及SfiI+NotI酶切结果 | 第32-33页 |
| 2.4.5 阳性率鉴定结果 | 第33-34页 |
| 2.4.6 抗体库库容鉴定 | 第34页 |
| 2.4.7 抗体库多样性鉴定 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 小结 | 第36-37页 |
| 3. 试验二 双峰驼重链抗体特异性多抗的制备 | 第37-47页 |
| 3.1 技术路线图 | 第37-38页 |
| 3.2 试验材料及仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.1 双峰驼血浆 | 第38页 |
| 3.2.2 主要试剂及耗材 | 第38页 |
| 3.2.3 溶液的配制 | 第38页 |
| 3.2.4 仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.5 实验动物 | 第39页 |
| 3.3 试验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 抗原的制备—离子交换层析法纯化蛋白 | 第39页 |
| 3.3.2 蛋白纯度及浓度测定 | 第39-41页 |
| 3.3.3 骆驼重链抗体多抗的制备 | 第41页 |
| 3.3.4 免疫血清抗体效价测定(间接ELISA) | 第41-42页 |
| 3.3.5 抗体特异性测定(间接ELISA) | 第42页 |
| 3.3.6 Western blot检测多抗血清特异性 | 第42-43页 |
| 3.4 试验结果 | 第43-46页 |
| 3.4.1 双峰驼各亚型抗体的纯化结果 | 第43页 |
| 3.4.2 BCA法蛋白浓度测定结果 | 第43-44页 |
| 3.4.3 免疫血清抗体效价测定结果 | 第44页 |
| 3.4.4 重链抗体特异性测定结果 | 第44-45页 |
| 3.4.5 Western blot鉴定多抗血清特异性 | 第45-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46页 |
| 3.6 小结 | 第46-47页 |
| 4. 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
