| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 文献综述 | 第16-37页 |
| 1 罗汉果三萜皂苷研究概述 | 第16-20页 |
| 1.1 药理活性研究 | 第16-18页 |
| 1.1.1 抗肿瘤作用 | 第16-17页 |
| 1.1.2 对血糖、血脂的影响 | 第17-18页 |
| 1.1.3 其他药理活性 | 第18页 |
| 1.2 药代动力学研究 | 第18-20页 |
| 2 葫芦二烯醇研究概述 | 第20-23页 |
| 2.1 葫芦二烯醇在植物中的分布 | 第20页 |
| 2.2 葫芦二烯醇药理活性 | 第20-21页 |
| 2.3 葫芦二烯醇在葫芦烷型三萜皂苷生物合成途径中的作用 | 第21-22页 |
| 2.4 葫芦二烯醇合成酶基因及其表达的研究 | 第22页 |
| 2.5 总结与展望 | 第22-23页 |
| 3 三萜皂苷的合成生物学研究现状 | 第23-30页 |
| 3.1 三萜皂苷的生物合成途径研究 | 第24-27页 |
| 3.2 三萜皂苷的合成生物学研究 | 第27-30页 |
| 3.2.1 齐墩果酸的合成生物学研究 | 第27-28页 |
| 3.2.2 人参皂苷的合成生物学研究 | 第28-29页 |
| 3.2.3 罗汉果甜苷的合成生物学研究 | 第29-30页 |
| 3.3 总结与展望 | 第30页 |
| 4 代谢工程改造酿酒酵母生产萜类化合物的研究现状 | 第30-35页 |
| 4.1 酿酒酵母合成萜类化合物的生物途径 | 第31-33页 |
| 4.2 酿酒酵母合成萜类化合物的研究策略 | 第33-34页 |
| 4.3 酿酒酵母发酵工艺优化研究 | 第34-35页 |
| 5 立题依据及意义 | 第35-37页 |
| 第一部分 葫芦二烯醇生物合成研究 | 第37-73页 |
| 第1章 底盘酵母菌株筛选 | 第37-44页 |
| 1.1 材料 | 第37-39页 |
| 1.1.1 菌株 | 第37页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第37-39页 |
| 1.1.3 溶剂和培养基 | 第39页 |
| 1.2 方法 | 第39-40页 |
| 1.2.1 酿酒酵母菌株生长速率比较 | 第39页 |
| 1.2.2 菌株对外源萜类的耐受性 | 第39页 |
| 1.2.3 菌株内源角鲨烯含量分析 | 第39-40页 |
| 1.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 1.3.1 酿酒酵母菌株生长速率比较 | 第40-41页 |
| 1.3.2 菌株对外源萜类的耐受性 | 第41-42页 |
| 1.3.3 菌株内源角鲨烯含量分析 | 第42-43页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第43-44页 |
| 第2章 同源CS基因表达能力比较研究 | 第44-55页 |
| 1.1 材料 | 第45-48页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第45页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第45-47页 |
| 1.1.3 溶剂和培养基 | 第47-48页 |
| 1.2 方法 | 第48-51页 |
| 1.2.1 pCEV-G4-Km-USER载体构建 | 第48页 |
| 1.2.2 CS基因表达载体构建 | 第48-50页 |
| 1.2.3 酿酒酵母转化 | 第50-51页 |
| 1.2.4 重组菌株摇瓶培养 | 第51页 |
| 1.2.5 菌体生物量的测定 | 第51页 |
| 1.2.6 代谢物产物分析 | 第51页 |
| 1.3 结果与分析 | 第51-54页 |
| 1.3.1 重组质粒和工程菌株的构建 | 第51-52页 |
| 1.3.2 重组菌株目标产物分析 | 第52-54页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第54-55页 |
| 第3章 酵母菌株内源代谢途径调控对CS基因表达影响 | 第55-64页 |
| 第1节 转录因子UPC2过表达对CS基因表达影响 | 第55-60页 |
| 1.1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第55页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第55页 |
| 1.1.3 溶剂和培养基 | 第55-56页 |
| 1.2 方法 | 第56-58页 |
| 1.2.1 酵母基因组的提取 | 第56页 |
| 1.2.2 UPC2基因表达载体构建 | 第56-58页 |
| 1.2.3 酿酒酵母转化 | 第58页 |
| 1.3 结果与分析 | 第58-59页 |
| 1.3.1 重组质粒和工程菌株的构建 | 第58页 |
| 1.3.2 工程菌株目标产物分析 | 第58-59页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第59-60页 |
| 第2节 限速酶基因tHMGR、SQS、SQE对CS基因表达影响 | 第60-64页 |
| 2.1 材料 | 第60-61页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第60页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第60-61页 |
| 2.1.3 溶剂和培养基 | 第61页 |
| 2.2 方法 | 第61-62页 |
| 2.2.1 pCEV-G4-Ph-USER-tHMGR载体的构建 | 第61-62页 |
| 2.2.2 pCEV-G4-Ph-USER-tHMGR-SQS2ASQE载体的构建 | 第62页 |
| 2.2.3 酿酒酵母转化 | 第62页 |
| 2.2.4 代谢物分析方法 | 第62页 |
| 2.3 结果与分析 | 第62-63页 |
| 2.3.1 重组质粒和工程菌株的构建 | 第62-63页 |
| 2.3.2 重组菌株目标产物分析 | 第63页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第63-64页 |
| 第4章 重组菌株发酵工艺优化 | 第64-70页 |
| 1.1 材料 | 第64-65页 |
| 1.2 方法 | 第65-66页 |
| 1.2.1 基础培养条件的优化 | 第65-66页 |
| 1.2.2 分批补料发酵 | 第66页 |
| 1.3 结果与分析 | 第66-69页 |
| 1.3.1 正交实验结果及方差分析 | 第66-68页 |
| 1.3.2 分批补料发酵结果 | 第68-69页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第69-70页 |
| 第5章 外源物质添加对产物积累的影响 | 第70-73页 |
| 1.1 材料 | 第70页 |
| 1.2 方法 | 第70-71页 |
| 1.2.1 添加物质制备 | 第70-71页 |
| 1.2.2 酵母菌株培养 | 第71页 |
| 1.2.3 代谢物产物分析 | 第71页 |
| 1.3 结果与分析 | 第71-72页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第72-73页 |
| 第二部分 罗汉果三萜化合物生物活性及大鼠血浆药代动力学研究 | 第73-98页 |
| 第1章 罗汉果三萜体外活性研究 | 第73-82页 |
| 第1节 肿瘤细胞增殖抑制研究 | 第73-78页 |
| 1.1 材料 | 第73-74页 |
| 1.2 方法 | 第74页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第74页 |
| 1.2.2 受试药物的配制 | 第74页 |
| 1.2.3 细胞增殖抑制试验 | 第74页 |
| 1.3 结果与分析 | 第74-76页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第76-78页 |
| 第2节 激活AMPK磷酸化活性 | 第78-82页 |
| 2.1 材料 | 第78页 |
| 2.2 方法 | 第78-79页 |
| 2.2.1 受试药物的配制 | 第78-79页 |
| 2.2.2 HTRF法检测AMPK活性 | 第79页 |
| 2.3 结果与分析 | 第79-80页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第80-82页 |
| 第2章 罗汉果甜苷V及其苷元在大鼠血浆中的药动学研究 | 第82-98页 |
| 1.1 材料 | 第82页 |
| 1.1.1 药品 | 第82页 |
| 1.1.2 试剂和仪器 | 第82页 |
| 1.2 方法 | 第82-92页 |
| 1.2.1 实验设计方案 | 第82-83页 |
| 1.2.2 血浆样品采集 | 第83页 |
| 1.2.3 生物样品测定方法的建立 | 第83-86页 |
| 1.2.4 方法学验证 | 第86-92页 |
| 1.2.5 药代动力学参数的计算 | 第92页 |
| 1.3 研究结果及分析 | 第92-96页 |
| 1.3.1 血药浓度-时间数据及曲线 | 第92-94页 |
| 1.3.2 药代动力学参数 | 第94-96页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第96-98页 |
| 总结与展望 | 第98-101页 |
| 1 总结 | 第98-99页 |
| 2 创新点 | 第99页 |
| 3 展望 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间主要研究成果 | 第114-115页 |
| 附录 | 第115-133页 |
