| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 LPA促进卵巢癌细胞A2780和HO8910的增殖和迁移 | 第13-23页 |
| 1 材料与方法 | 第13-18页 |
| 1.1 材料 | 第13-15页 |
| 1.1.1 实验器材 | 第13页 |
| 1.1.2 实验材料 | 第13页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第13-14页 |
| 1.1.4 常用溶剂的配置 | 第14-15页 |
| 1.2 方法 | 第15-18页 |
| 1.2.1 人卵巢癌细胞A2780和HO8910的培养 | 第15-17页 |
| 1.2.1.1 人卵巢癌细胞的复苏 | 第15页 |
| 1.2.1.2 人卵巢癌细胞的传代 | 第15-16页 |
| 1.2.1.3 人卵巢癌细胞的冻存 | 第16-17页 |
| 1.2.2 CCK-8法测定细胞增殖 | 第17页 |
| 1.2.3 细胞迁移 | 第17-18页 |
| 2 结果与分析 | 第18-22页 |
| 2.1 人卵巢癌A2780和HO8910的培养 | 第18-19页 |
| 2.2 人卵巢癌细胞A2780和HO8910的细胞标准曲线 | 第19-20页 |
| 2.3 LPA刺激能够促进A2780和HO8910细胞迁移 | 第20-21页 |
| 2.4 LPA刺激能够促进A2780和HO8910细胞增殖 | 第21-22页 |
| 讨论 | 第22-23页 |
| 第二章 人卵巢癌细胞A2780/HO8910LPA受体表达情况及相关载体的筛选 | 第23-38页 |
| 1 材料与方法 | 第23-30页 |
| 1.1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1.1 实验器材 | 第23页 |
| 1.1.2 菌种与质粒 | 第23页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第23-24页 |
| 1.1.4 常用溶剂的配置 | 第24-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-30页 |
| 1.2.1 Real Time PCR检测A2780和HO8910细胞中LPA受体的mRNA表达 | 第25-28页 |
| 1.2.1.1 细胞RNA的提取 | 第25页 |
| 1.2.1.2 反转录获取cDNA | 第25-27页 |
| 1.2.1.3 Real Time PCR检测mRNA的表达量 | 第27-28页 |
| 1.2.2 摇菌 | 第28-29页 |
| 1.2.3 提质粒 | 第29页 |
| 1.2.4 脂质体转染实验 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2.1 人卵巢癌细胞A2780和HO8910中的LPA受体表达情况 | 第30-31页 |
| 2.2 LPA刺激卵巢癌细胞后受体表达变化 | 第31-32页 |
| 2.3 转染LPA1/LPA3过表达载体,检测卵巢癌细胞A2780和HO8910内LPA1/LPA3mRNA表达量 | 第32-33页 |
| 2.4 转染LPA1/LPA3干扰载体,检测卵巢癌细胞A2780和HO8910内LPA1/LPA3mRNA表达量 | 第33-37页 |
| 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 探索LPA介导的卵巢癌细胞A2780/HO8910增殖和迁移的信号通路 | 第38-64页 |
| 1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 1.1 材料 | 第38-40页 |
| 1.1.1 实验器材 | 第38页 |
| 1.1.2 实验药品 | 第38页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第38-39页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第39-40页 |
| 1.1.4.1 1.5 M的Tris-HCl(pH 8.8)的配制 | 第39页 |
| 1.1.4.2 1 MTris-HCl的配制 | 第39页 |
| 1.1.4.3 5×电泳缓冲液(Running buffer)的配制 | 第39页 |
| 1.1.4.4 10×转膜缓冲液(Transfer buffer)的配制 | 第39页 |
| 1.1.4.5 TBST Buffer液的配制 | 第39-40页 |
| 1.1.4.6 显影液和定影液的配制 | 第40页 |
| 1.1.4.7 柠檬酸缓冲液的配置(pH 6.0) | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-44页 |
| 1.2.1 Western Blot实验方法-细胞总蛋白的提取 | 第40-42页 |
| 1.2.2 SDS-PAGE浓缩胶和分离胶的配制 | 第42页 |
| 1.2.3 Wetern blot实验 | 第42-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-61页 |
| 2.1 Ki16425抑制LPA促进细胞迁移 | 第44-45页 |
| 2.2 shRNA-LPA3能够解除LPA促进细胞迁移的作用 | 第45-47页 |
| 2.3 LPA对HO8910细胞MMPs/TIMP的mRNA表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.4 PTX抑制LPA诱导的细胞迁移 | 第48-50页 |
| 2.5 shRNA-LPA3能够解除PTX抑制细胞迁移的作用 | 第50-51页 |
| 2.6 SB203580、PD98059抑制LPA促进细胞迁移的影响 | 第51-54页 |
| 2.7 BAY抑制LPA促进A2780和HO8910细胞迁移的作用 | 第54-57页 |
| 2.8 shRNA-LPA3能够解除LPA促进细胞增殖的作用 | 第57-58页 |
| 2.9 LPA能够促进卵巢癌A2780和HO8910细胞Bcl-2表达量的影响升高 | 第58-59页 |
| 2.10 EGF抑制剂AG1478对卵巢癌A2780和HO-8910细胞迁移的影响 | 第59-61页 |
| 讨论 | 第61-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 1、LPA能够促进卵巢癌细胞的增殖和迁移 | 第64页 |
| 2、卵巢癌细胞内LPA1/LPA3高表达 | 第64页 |
| 3、LPA是通过LPA3受体/G/n-MAPK-p38/抓K-NF- K B-MMP促进细胞的迁移 | 第64页 |
| 4、LPA通过LPA3受体促进卵巢癌细胞的增殖 | 第64-65页 |
| 综述 溶血磷脂酸对卵巢癌细胞影响的研究进展 | 第65-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第75页 |
