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小麦F-box蛋白基因TaFBA1在植物耐盐性中的功能分析

符号说明第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 前言第12-25页
    1.1 泛素-26S蛋白酶体降解途径第12页
    1.2 泛素连接酶E3的分类及结构特征第12-14页
        1.2.1 HECT型泛素连接酶第13页
        1.2.2 RING finger/U-box型泛素连接酶第13页
        1.2.3 APC复合体第13-14页
        1.2.4 CUL3-BTB复合体第14页
        1.2.5 SCF复合体第14页
    1.3 F-box结构及其功能第14-18页
        1.3.1 F-box结构第14页
        1.3.2 F-box功能第14-18页
            1.3.2.1 F-box对激素信号途径的调节第14-17页
            1.3.2.2 F-box调节光形态建成第17页
            1.3.2.3 F-box参与生物钟调节第17-18页
            1.3.2.4 F-box对植物环境胁迫耐性的调节第18页
    1.4 植物的盐胁迫耐性及其调节第18-24页
        1.4.1 高盐对植物的影响第18页
        1.4.2 植物对高盐胁迫的适应第18-24页
            1.4.2.1 植物耐盐的差异性第18-19页
            1.4.2.2 植物避盐机理第19-20页
            1.4.2.3 植物耐盐机理第20-22页
            1.4.2.4 盐胁迫的信号转导途径第22-24页
    1.5 本实验的目的意义第24-25页
2 材料与方法第25-40页
    2.1 实验材料第25-26页
        2.1.1 植物材料第25页
        2.1.2 实验材料的培养和处理第25页
        2.1.3 酶和各种生化试剂第25页
        2.1.4 PCR引物第25-26页
    2.2 实验方法第26-39页
        2.2.1 转基因烟草和拟南芥突变体的鉴定第26-29页
            2.2.1.1 CTAB法提取烟草和拟南芥基因组DNA第27页
            2.2.1.2 转基因烟草和拟南芥植物的PCR检测第27-29页
        2.2.2 转基因烟草基因表达水平的检测第29-31页
            2.2.2.1 TRIZOL法提取RNA第29-30页
            2.2.2.2 反转录cDNA第一条链的合成第30页
            2.2.2.3 荧光定量PCR检测基因的表达水平第30-31页
        2.2.3 转基因烟草F-box蛋白的Western杂交第31-33页
            2.2.3.1 植物总蛋白的提取第31页
            2.2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳第31-32页
            2.2.3.3 半干法蛋白转移第32-33页
            2.2.3.4 封闭与杂交第33页
        2.2.4 转基因烟草的生理指标检测第33-39页
            2.2.4.1 烟草种子萌发率统计第33-34页
            2.2.4.2 叶片相对含水量的测定第34页
            2.2.4.3 游离脯氨酸含量的测定第34页
            2.2.4.4 叶绿素含量测定第34页
            2.2.4.5 光合参数测定第34页
            2.2.4.6 超氧阴离子自由基及过氧化氢含量测定第34页
            2.2.4.7 ROS的活体检测第34-35页
            2.2.4.8 相对电导率和丙二醛含量检测第35页
            2.2.4.9 抗氧化物酶活性测定第35页
            2.2.4.10 Na~+和K~+含量测定第35页
            2.2.4.11 液泡膜的提取及纯化第35-36页
            2.2.4.12 细胞膜的纯化第36页
            2.2.4.13 液泡膜和质膜蛋白质含量的测定(Bradford法)第36页
            2.2.4.14 PM H~+-ATP酶活性的测定第36-37页
            2.2.4.15 V-ATP酶活性的测定第37页
            2.2.4.16 焦磷酸酶活性的测定第37页
            2.2.4.17 磷含量的测定第37-38页
            2.2.4.18 Na~+、K~+在根和叶中的动态运输第38-39页
    2.3 统计分析第39-40页
3 结果与分析第40-54页
    3.1 转基因株系的鉴定第40-41页
    3.2 过表达Ta FBA1提高转基因烟草的耐盐性第41-43页
    3.3 盐胁迫对成年转基因烟草的生物量及光合特性的影响第43-46页
    3.4 WT和转基因株系在盐胁迫下活性氧的积累和抗氧化能力分析第46页
    3.5 转基因株系和WT根和叶中的钠和钾含量第46-49页
    3.6 钠离子转运相关酶活性和胁迫防御相关基因表达对盐胁迫的响应第49-51页
    3.7 细胞Na~+和K~+离子流对盐胁迫的响应第51-53页
    3.8 拟南芥突变体atfbw2-4 对盐胁迫的响应第53-54页
4 讨论第54-57页
    4.1 过表达小麦TaFBA1增强了转基因烟草的耐盐性第54页
    4.2 抗氧化水平的提高可能参与了转基因株系的耐盐性第54-55页
    4.3 Na~+/K~+离子区域化可能参与转基因株系的耐盐性第55-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-70页
致谢第70-71页
攻读学位期间发表的论文及成果第71页

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