| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 序言 | 第10-22页 |
| 1 PDC 的结构与性质 | 第10-16页 |
| ·PDC 的基本结构特性 | 第11页 |
| ·PDC 的酶学性质 | 第11-12页 |
| ·PDC 的空间结构 | 第12-16页 |
| 2 pdc 基因 | 第16-20页 |
| 3 PDC 的应用 | 第20-22页 |
| 第一部分 红曲霉cDNA 文库的构建 | 第22-34页 |
| 1 引言 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-29页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·红曲霉的培养 | 第24页 |
| ·总RNA 提取 | 第24-25页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第25页 |
| ·LD PCR 扩增双链cDNA | 第25页 |
| ·蛋白酶K 消化 | 第25-26页 |
| ·SfiⅠ酶切 | 第26页 |
| ·cDNA 的分级分离纯化 | 第26页 |
| ·双链cDNA 与克隆载体pDNR-LIB 连接 | 第26-27页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第27页 |
| ·转化（电转） | 第27-28页 |
| ·文库的扩增 | 第28页 |
| ·原始文库质量鉴定 | 第28-29页 |
| 3 结果与讨论 | 第29-32页 |
| ·总RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·双链cDNA 的合成及分级 | 第30-31页 |
| ·文库质量的检测及扩增 | 第31-32页 |
| 4 结论 | 第32-34页 |
| 第二部分 红曲霉丙酮酸脱羧酶基因的克隆 | 第34-47页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-42页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要试剂和培养基的配制 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-42页 |
| ·丙酮酸脱羧酶基因的筛选 | 第36-37页 |
| ·PDC 基因的克隆 | 第37-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-46页 |
| ·红曲霉pdc 基因的筛选与测序分析 | 第42-44页 |
| ·pdc 基因的PCR 扩增结果 | 第44页 |
| ·原核表达载体pET-PDC 构建 | 第44-45页 |
| ·重组质粒测序结果与分析 | 第45-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 第三部分 红曲霉丙酮酸脱羧酶的表达、纯化及复性 | 第47-59页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·主要试剂和培养基的配制 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-55页 |
| ·重组质粒pET-PDC 转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第50-52页 |
| ·诱导表达 | 第52-53页 |
| ·蛋白抽提 | 第53页 |
| ·在变性条件下纯化含有6×his 标签的融合蛋白 | 第53-54页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第54页 |
| ·重组PDC 的复性 | 第54-55页 |
| 3 结果与讨论 | 第55-58页 |
| ·转化子的菌落PCR 鉴定 | 第55页 |
| ·重组PDC 的SDS-PAGE 检测 | 第55-56页 |
| ·蛋白抽提 | 第56-57页 |
| ·蛋白纯化 | 第57-58页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 第四部分 红曲霉丙酮酸脱羧酶的酶学性质分析 | 第59-69页 |
| 1 前言 | 第59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-65页 |
| ·材料 | 第59-61页 |
| ·主要仪器设备 | 第59-60页 |
| ·菌株和质粒 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要试剂和培养基的配制 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-65页 |
| ·酶活测定方法 | 第61-62页 |
| ·野生型红曲霉PDC 的提取分离 | 第62-64页 |
| ·酶学性质分析 | 第64-65页 |
| 3 结果与讨论 | 第65-68页 |
| ·酶的活性 | 第65页 |
| ·红曲霉PDC 酶学性质分析 | 第65-68页 |
| ·Km 值 | 第65页 |
| ·温度 | 第65-66页 |
| ·pH | 第66-68页 |
| 4 结论 | 第68-69页 |
| 总结与展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 英文缩略词表 | 第75-76页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |