| 致谢 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-13页 |
| abstract | 第13-19页 |
| 论文创新点 | 第20-21页 |
| 缩略词表 | 第21-26页 |
| 引言 | 第26-30页 |
| 实验器材与仪器 | 第30-33页 |
| 1.1 实验试剂 | 第30-31页 |
| 1.2 实验仪器 | 第31页 |
| 1.3 常用实验液体配制 | 第31-32页 |
| 1.3.1 药物PFOS配制 | 第31页 |
| 1.3.2 实验相关溶液 | 第31-32页 |
| 1.4 实验动物、细胞株 | 第32-33页 |
| 实验方法 | 第33-42页 |
| 1 细胞的培养 | 第33-34页 |
| 1.1 原代小鼠胚胎成纤维(mouse embryonic fibroblast,MEF)细胞制作 | 第33页 |
| 1.2 饲养层细胞制备 | 第33-34页 |
| 1.3 小鼠ES胞支持培养 | 第34页 |
| 2 ES细胞分化培养 | 第34-35页 |
| 2.1 | 第34-35页 |
| 2.1.1 悬滴培养 | 第34页 |
| 2.1.2 悬浮培养 | 第34页 |
| 2.1.3 贴壁培养 | 第34-35页 |
| 2.2 分化率统计 | 第35页 |
| 3 Weste-blot检测蛋白表达 | 第35-36页 |
| 3.1 蛋白提取 | 第35页 |
| 3.1.1 总蛋白提取 | 第35页 |
| 3.1.2 线粒体蛋白提取 | 第35页 |
| 3.2 蛋白质印迹 | 第35-36页 |
| 4 小鼠ES细胞衍生的心肌细胞的纯化 | 第36页 |
| 5 免疫荧光法检测心肌特异性蛋白α-Actinin | 第36页 |
| 6 流式细胞术定量检测小鼠ES细胞体外定向分化的心肌细胞数量 | 第36-37页 |
| 7 JC-1染色测定细胞线粒体膜电位变化及线粒体染色 | 第37页 |
| 8 免疫荧光检测小鼠ES细胞衍生的心肌细胞HK2与线粒体的共定位 | 第37页 |
| 9 透射电镜检测小鼠ES细胞衍生的心肌细胞线粒体结构 | 第37-38页 |
| 10 小鼠ES细胞衍生的心肌细胞内Ca~(2+)浓度的测定 | 第38页 |
| 10.1 细胞悬液制备 | 第38页 |
| 10.2 Fluo-4AM负载 | 第38页 |
| 10.3 Ca~(2+)浓度的计算 | 第38页 |
| 11 Ca~(2+)瞬变的测定 | 第38-39页 |
| 11.1 溶液配制 | 第38-39页 |
| 11.2 操作步骤 | 第39页 |
| 11.2.1 小鼠ES细胞衍生的心肌细胞内Ca~(2+)瞬变的测定 | 第39页 |
| 11.2.2 小鼠ES细胞衍生的心肌细胞线粒体内Ca~(2+)瞬变的测定 | 第39页 |
| 12 小鼠ES细胞衍生的心肌细胞ATP产量的测定 | 第39-40页 |
| 13 小鼠ES细胞衍生的心肌细胞乳酸产量的测定 | 第40页 |
| 14 薄层色谱检测小鼠ES细胞衍生的心肌细胞脂肪酸含量 | 第40页 |
| 15 免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| 16 数据分析 | 第41-42页 |
| 第一部分 PFOS致小鼠ES细胞分化心肌细胞毒性作用及衍生瓜肌细胞线粒体损伤 | 第42-60页 |
| 1 实验结果 | 第42-56页 |
| 1.1 PFOS致小鼠ES细胞分化心肌细胞毒性作用 | 第42-44页 |
| 1.2 PFOS对ESC-CMs内[Ca~(2+)]_i及Ca~(2+)瞬变的影响 | 第44-47页 |
| 1.2.1 PFOS降低ESC-CMs内[Ca~(2+)]_i | 第44-45页 |
| 1.2.2 PFOS对ESC-CMs Ca~(2+)瞬变的影响 | 第45-46页 |
| 1.2.3 PFOS对ESC-CMs Ca~(2+)信号相关蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 1.3 PFOS致ESC-CMs线粒体损伤 | 第47-56页 |
| 1.3.1 PFOS影响ESC-CMs的ATP合成 | 第47-48页 |
| 1.3.2 PFOS影响ESC-CMs的线粒体膜电位 | 第48-50页 |
| 1.3.3 PFOS影响ESC-CMs线粒体和相关细胞器结构 | 第50-52页 |
| 1.3.4 PFOS对ESC-CMs线粒体与内质网偶联的影响 | 第52-53页 |
| 1.3.5 PFOS对小鼠ES细胞定向心肌细胞分化过程中乳酸生成的影响 | 第53-54页 |
| 1.3.6 PFOS对ESC-CMs内脂肪酸含量的影响 | 第54-55页 |
| 1.3.7 PFOS对ESC-CMs线粒体Ca~(2+)瞬变的影响 | 第55-56页 |
| 2 讨论 | 第56-58页 |
| 3 小结 | 第58-60页 |
| 第二部分 PFOS致小鼠ES细胞分化心肌细胞线粒体损仿相关机制研究 | 第60-68页 |
| 1 实验结果 | 第60-65页 |
| 1.1 PFOS对MAM连接蛋白Mfns及Grp75表达的影响 | 第60-61页 |
| 1.2 PFOS增加Akt与IP3R受体的结合从而减少线粒体Ca~(2+)瞬变 | 第61页 |
| 1.3 PFOS对EGFR/Rictor信号通路的影响 | 第61-65页 |
| 1.3.1 PFOS对EGFR/Rictor信号通路的影响 | 第61-62页 |
| 1.3.2 PFOS通过mTORC2信号通路降低线粒体膜电位 | 第62-64页 |
| 1.3.3 PFOS通过Akt激活SREBP1裂解增加脂肪酸合成 | 第64-65页 |
| 2 讨论 | 第65-67页 |
| 3 小结 | 第67-68页 |
| 总结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 综述 | 第75-87页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 作者简历及在读期间所取得研究成果 | 第87-88页 |
