| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 大豆转座子的分类与特性 | 第14-17页 |
| 1.1.1 大豆中的反转录转座子 | 第15-16页 |
| 1.1.2 大豆中的DNA转座子 | 第16-17页 |
| 1.2 大豆转座子的重要性 | 第17-20页 |
| 1.2.1 外源转座子在大豆中的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.2 大豆内源性转座子的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 大豆转座子Tgm9的改造方案 | 第20-22页 |
| 第二章 转座子系的质粒构建 | 第22-46页 |
| 2.1 材料、试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 核酸提取 | 第24-27页 |
| 2.2.1.1 DNA提取 | 第24页 |
| 2.2.1.2 RNA提取 | 第24-26页 |
| 2.2.1.3 质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 各类PCR反应 | 第27-29页 |
| 2.2.2.1 高保真PCR反应 | 第27页 |
| 2.2.2.2 Colony PCR | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 RT-PCR | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| 2.2.4 酶切反应 | 第30页 |
| 2.2.5 连接反应 | 第30-32页 |
| 2.2.6 转化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 PCR片段的加磷酸反应 | 第33页 |
| 2.2.8 酶切片段的粘末端补平反应 | 第33-34页 |
| 2.3 实验设计 | 第34-38页 |
| 2.3.1 正对照载体pLM-B001_F3'5'H的构建方案 | 第34-35页 |
| 2.3.2 转座子系质粒构建方案 | 第35-37页 |
| 2.3.2.1 pLM-B001_dTgm9-1_F3'5'H的构建 | 第36页 |
| 2.3.2.2 pLM-B001_dTgm9-2_F3'5'H和pLM-B001_dTgm9-3_F3'5'H的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.3 引物 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-46页 |
| 2.4.1 载体18T_F3'5'H、18T_5'-TR及18T_3'-TR的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.2 载体pLM-B001_F3'5'H的构建 | 第40-41页 |
| 2.4.3 载体pBS_5'-TR的构建 | 第41-42页 |
| 2.4.4 载体pBS_dTgm9-1的构建 | 第42页 |
| 2.4.5 载体pBS_dTgm9-1_F3'5'H的构建 | 第42-43页 |
| 2.4.6 载体pBS_dTgm9-2_F3'5'H和pBS_dTgm9-3_F3'5'H的构建 | 第43-44页 |
| 2.4.7 载体pLM-B001_dTgm9-1_F3'5'H、pLM-B001_dTgm9-2_F3'5'H和pLM-B001_dTgm9-3_F3'5'H的构建 | 第44-45页 |
| 2.4.8 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 转座酶系的质粒构建 | 第46-54页 |
| 3.1 材料、试剂 | 第46页 |
| 3.1.1 材料 | 第46页 |
| 3.1.2 试剂 | 第46页 |
| 3.2 方法 | 第46页 |
| 3.3 实验设计 | 第46-48页 |
| 3.3.1 转座酶系质粒构建方案 | 第46-47页 |
| 3.3.2 转座酶系质粒的构建 | 第47页 |
| 3.3.3 引物 | 第47-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-54页 |
| 3.4.1 载体18T_GmTNP2和18T_GmTNP1的构建 | 第49-50页 |
| 3.4.2 载体pLM-B001_GmTNP2的构建 | 第50-51页 |
| 3.4.3 载体18T_pUbi7_GmTNP1的构建 | 第51页 |
| 3.4.4 载体18T_pUbi7_GmTNP1_nosT的构建 | 第51-52页 |
| 3.4.5 转座酶系载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.4.6 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 农杆菌介导的大豆转化 | 第54-71页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第54-56页 |
| 4.1.1 材料 | 第54页 |
| 4.1.2 试剂 | 第54-56页 |
| 4.2 方法 | 第56-66页 |
| 4.2.1 根瘤农杆菌的转化 | 第56-57页 |
| 4.2.2 种子消毒 | 第57-58页 |
| 4.2.2.1 干燥表面消毒 | 第57页 |
| 4.2.2.2 浸泡种子 | 第57-58页 |
| 4.2.3 农杆菌接种 | 第58-60页 |
| 4.2.3.1 农杆菌菌液准备 | 第58页 |
| 4.2.3.2 共培养 | 第58-60页 |
| 4.2.4 GUS基因瞬时表达 | 第60-61页 |
| 4.2.5 茎的诱导 | 第61-62页 |
| 4.2.6 茎的伸长 | 第62-64页 |
| 4.2.7 根的诱导及伸长 | 第64-65页 |
| 4.2.8 叶片涂抹法快速检测T_0代大豆转化植株 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第66-71页 |
| 4.3.1 转化GV3101感受态细胞 | 第66页 |
| 4.3.2 共培养 | 第66页 |
| 4.3.3 GUS染色结果 | 第66-67页 |
| 4.3.4 茎诱导 | 第67页 |
| 4.3.5 茎伸长 | 第67-68页 |
| 4.3.6 根的诱导 | 第68-69页 |
| 4.3.7 叶片涂抹法快速检测T_0代大豆转化植株 | 第69页 |
| 4.3.8 本章小结 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
