| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 目录 | 第13-17页 |
| 1 引言 | 第17-27页 |
| ·病毒诱导的基因沉默(VIGS) | 第17-21页 |
| ·VIGS的发现与发展 | 第18页 |
| ·VIGS的作用机制 | 第18-19页 |
| ·VIGS在植物基因功能研究中的原理与应用 | 第19页 |
| ·影响VIGS沉默效率的因素 | 第19-21页 |
| ·VIGS技术的优缺点 | 第21页 |
| ·植物线粒体解偶联蛋白 | 第21-26页 |
| ·解偶联蛋白的发现历程 | 第22页 |
| ·解偶联蛋白的结构、基因表达与分布 | 第22-23页 |
| ·解偶联蛋白的解偶联机制 | 第23-24页 |
| ·线粒体活性氧的产生 | 第24-25页 |
| ·线粒体解偶联蛋白在增强植物抵御逆境胁迫中的作用 | 第25页 |
| ·植物解偶联蛋白与交替氧化酶的相互关系 | 第25-26页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 番茄LePDS与LeUCP基因沉默(VIGS)体系的建立 | 第27-43页 |
| ·材料与试剂 | 第27-29页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·酶及试剂 | 第27-28页 |
| ·引物序列 | 第28页 |
| ·常用试剂配制 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·番茄叶片总RNA提取、纯化和cDNA合成 | 第29页 |
| ·番茄LePDS、LeUCP cDAN片段PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的电泳纯化回收 | 第30-31页 |
| ·回收DNA片段与pGEM-T easy载体连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态的制备及连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·序列测定及分析 | 第32页 |
| ·质粒DNA提取 | 第32-33页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第33页 |
| ·农杆菌GV3101电转化感受态细胞的制备及电转化 | 第33-34页 |
| ·番茄幼苗VIGS侵染方法 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-41页 |
| ·番茄LePDS、LeUCP基因PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·目的基因片段与pGEM-T easy的连接与测序鉴定 | 第35-37页 |
| ·含目的基因片段pGEM-T easy质粒酶切回收与鉴定 | 第37页 |
| ·病毒载体TRV-LePDS、TRV-LeUCP构建 | 第37-40页 |
| ·番茄LePDS基因沉默植株表型观察 | 第40页 |
| ·番茄植株LePDS基因沉默效率 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 3 番茄线粒体解偶联蛋白基因(LeUCP)沉默植株鉴定及其对番茄光合作用的影响 | 第43-56页 |
| ·材料培养与试验设计 | 第43-44页 |
| ·试验方法 | 第44-46页 |
| ·总RNA提取、纯化和cDNA合成 | 第44页 |
| ·生物量的测定 | 第44页 |
| ·光合气体交换与叶绿素荧光测定 | 第44页 |
| ·Rubisco活性的测定 | 第44-45页 |
| ·FBPase活性的测定 | 第45页 |
| ·PSⅡ光化学量子效率(ΦPSⅡ)和碳同化量子产量(ΦCO_2) 的测定 | 第45页 |
| ·其它电子流的计算 | 第45-46页 |
| ·叶绿素荧光成像分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-53页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对番茄植株的表观、地上部与根系生物量的影响 | 第46-47页 |
| ·病毒TRV的分子检测 | 第47-48页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默植株的鉴定 | 第48页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对光合作用光响应曲线的影响 | 第48-49页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对光合参数的影响 | 第49-51页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对Rubisco及FBPase活性的影响 | 第51页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对叶绿素荧光参数的影响 | 第51-52页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对电子流分配的影响 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| 4 番茄线粒体解偶联蛋白基因(LeUCP)沉默对番茄呼吸作用及抗逆性的影响 | 第56-80页 |
| ·材料培养和试验设计 | 第56-57页 |
| ·材料培养 | 第57页 |
| ·试验设计 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-63页 |
| ·总RNA提取、纯化和cDNA合成 | 第57-58页 |
| ·呼吸速率的测定 | 第58页 |
| ·细胞色素氧化酶活性的测定 | 第58-59页 |
| ·丙酮酸含量的测定 | 第59页 |
| ·泛醌库氧化还原状态的测定 | 第59页 |
| ·线粒体顺乌头酸酶含量的测定 | 第59-60页 |
| ·柠檬酸含量的测定 | 第60页 |
| ·NADH及NAD~+的测定 | 第60页 |
| ·H_2O_2含量测定 | 第60-61页 |
| ·H_2O_2和O_2~(.-)组织化学染色 | 第61页 |
| ·叶片O_2~(.-)产生速率的检测 | 第61页 |
| ·叶绿素荧光成像分析 | 第61-62页 |
| ·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第62页 |
| ·抗氧化酶活性的测定 | 第62-63页 |
| ·AsA和DHA含量和谷胱甘肽含量的测定 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-77页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对呼吸作用的影响 | 第63-64页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对细胞色素氧化酶及其基因表达的影响 | 第64-65页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对交替氧化酶基因表达的影响 | 第65-66页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对泛醌库和丙酮酸含量的影响 | 第66页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对线粒体顺乌头酸酶活性和柠檬酸含量的影响 | 第66-67页 |
| ·番茄LeUCP基因沉默对NADH含量及其氧化还原状态的影响 | 第67-68页 |
| ·PQ对番茄LeUCP基因表达量的影响 | 第68-69页 |
| ·番茄LeUCP基因介导PQ对H_2O_2含量的影响 | 第69页 |
| ·番茄LeUCP基因介导PQ对O_2~(.-)含量的影响 | 第69-71页 |
| ·番茄LeUCP基因介导番茄对PQ抗性的调控 | 第71页 |
| ·番茄LeUCP基因介导PQ对MDA的影响 | 第71-72页 |
| ·番茄LeUCP基因介导PQ对抗氧化酶活性的影响 | 第72-74页 |
| ·番茄LeUCP基因介导PQ对番茄抗坏血酸和谷胱甘肽含量的影响 | 第74-75页 |
| ·番茄LeUCP基因介导高温对H_2O_2和O_2~-含量的影响 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| 5 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 个人简历及发表文章 | 第91页 |
