| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 昆虫的嗅觉系统 | 第10页 |
| 1.2 昆虫气味结合蛋白OBPs的研究进展 | 第10-16页 |
| 1.2.1 OBPs的一般特性 | 第10-12页 |
| 1.2.2 OBPs的分类 | 第12页 |
| 1.2.3 OBPs的三维结构 | 第12-14页 |
| 1.2.4 OBPs的表达分析 | 第14-15页 |
| 1.2.5 OBPs的生理功能 | 第15-16页 |
| 1.3 蜜蜂的化学通讯 | 第16-17页 |
| 1.4 OBPs与中华蜜蜂抗螨关系 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第19页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第19-22页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第20-22页 |
| 2.3 总RNA的提取及检测 | 第22-23页 |
| 2.3.1 RNA提取前的准备 | 第22页 |
| 2.3.2 Total RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.3 RNA的检测 | 第23页 |
| 2.4 cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| 2.5 各类引物的设计 | 第24-25页 |
| 2.5.1 克隆用引物 | 第24-25页 |
| 2.5.2 荧光定量用引物 | 第25页 |
| 2.5.3 原核表达扩增用引物 | 第25页 |
| 2.6 目的基因的克隆、鉴定及序列测定 | 第25-27页 |
| 2.6.1 PCR扩增反应 | 第25-26页 |
| 2.6.2 PCR产物的回收与纯化 | 第26页 |
| 2.6.3 纯化产物与克隆载体的连接 | 第26-27页 |
| 2.6.4 转化 | 第27页 |
| 2.6.5 阳性鉴定与测序 | 第27页 |
| 2.7 序列分析 | 第27页 |
| 2.8 目的基因的蛋白结构预测 | 第27-28页 |
| 2.9 目的基因的表达谱分析 | 第28-29页 |
| 2.9.1 中华蜜蜂内参基因的验证 | 第28页 |
| 2.9.2 标准曲线的建立 | 第28-29页 |
| 2.9.3 荧光定量PCR反应 | 第29页 |
| 2.9.4 数据统计与分析 | 第29页 |
| 2.10 中华蜜蜂AcerOBP14的原核表达 | 第29-31页 |
| 2.10.1 目的基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.10.2 原核表达载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.10.3 质粒提取 | 第30页 |
| 2.10.4 转化表达菌株 | 第30-31页 |
| 2.10.5 重组蛋白试表达 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-55页 |
| 3.1 中华蜜蜂总RNA质量鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 目的基因的克隆及序列分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 目的基因的扩增及鉴定 | 第32页 |
| 3.2.2 目的基因的序列分析 | 第32-35页 |
| 3.3 中华蜜蜂气味结合蛋白的生物信息学分析 | 第35-43页 |
| 3.3.1 蛋白的基本理化性质 | 第35-37页 |
| 3.3.2 信号肽预测 | 第37-38页 |
| 3.3.3 跨膜结构预测 | 第38页 |
| 3.3.4 保守结构区域的分析 | 第38-39页 |
| 3.3.5 功能结构域 | 第39页 |
| 3.3.6 疏水性分析 | 第39-40页 |
| 3.3.7 二硫键预测 | 第40-41页 |
| 3.3.8 亚细胞定位分析 | 第41-42页 |
| 3.3.9 高级结构预测 | 第42-43页 |
| 3.4 系统进化树分析 | 第43-46页 |
| 3.5 中华蜜蜂OBPs基因表达谱分析 | 第46-53页 |
| 3.5.1 中华蜜蜂内参基因的验证 | 第46-47页 |
| 3.5.2 标准曲线的构建 | 第47-48页 |
| 3.5.3 扩增动力学曲线和熔解曲线 | 第48-50页 |
| 3.5.4 中华蜜蜂气味结合蛋白mRNA时空表达分析 | 第50-53页 |
| 3.6 AcerOBP14的原核表达 | 第53-55页 |
| 3.6.1 载体的构建及鉴定 | 第53-54页 |
| 3.6.2 AcerOBP14重组蛋白的表达条件优化 | 第54页 |
| 3.6.3 AcerOBP14重组蛋白的表达形式分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 关于中华蜜蜂4个AcerOBPs的分类与进化 | 第55-57页 |
| 4.2 关于中华蜜蜂4个AcerOBPs的时空表达特性 | 第57-58页 |
| 4.3 关于中华蜜蜂AcerOBP14的原核表达 | 第58-59页 |
| 5 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| Abstract | 第66-67页 |
| 致谢 | 第68页 |
