| 摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 精原干细胞与精子发生 | 第11-12页 |
| 1.1 精原干细胞概念及其来源 | 第11页 |
| 1.2 精子发生 | 第11-12页 |
| 2 精原干细胞的生物学特性 | 第12-15页 |
| 2.1 精原干细胞形态及其在曲精细管中的分布 | 第12-13页 |
| 2.2 精原干细胞的凋亡 | 第13-14页 |
| 2.3 精原干细胞表面分子标记 | 第14-15页 |
| 3 精原干细胞的分离纯化与体外培养影响因素 | 第15-19页 |
| 3.1 精原干细胞的分离纯化 | 第15-17页 |
| 3.1.1 精原干细胞的分离方法 | 第16页 |
| 3.1.2 精原干细胞的纯化方法 | 第16-17页 |
| 3.2 精原干细胞体外培养的影响因素 | 第17-19页 |
| 3.2.1 温度 | 第18页 |
| 3.2.2 基础培养基 | 第18页 |
| 3.2.3 饲养层 | 第18-19页 |
| 3.2.4 清 | 第19页 |
| 3.2.5 生长因子 | 第19页 |
| 4 硒对精子发生的作用 | 第19-21页 |
| 4.1 微量元素硒的简介 | 第19-20页 |
| 4.2 硒的抗氧化作用 | 第20页 |
| 4.3 硒与精子发生 | 第20-21页 |
| 5 本研究意义 | 第21-22页 |
| 材料与方法 | 第22-32页 |
| 1 试验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 试验动物 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 溶液配置 | 第22-23页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-30页 |
| 2.1 样品采集 | 第24页 |
| 2.2 绵羊睾丸切片制作 | 第24页 |
| 2.3 H-E染色 | 第24页 |
| 2.4 免疫荧光 | 第24-25页 |
| 2.5 绵羊精原干细胞的分离 | 第25页 |
| 2.6 绵羊精原干细胞的纯化 | 第25页 |
| 2.7 绵羊精原干细胞纯度的计算 | 第25-26页 |
| 2.8 绵羊精原干细胞计数 | 第26页 |
| 2.9 绵羊精原干细胞的培养 | 第26页 |
| 2.10 培养96h绵羊精原干细胞的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.11 绵羊精原干细胞细胞增殖的检测 | 第27页 |
| 2.12 氧自由基(ROS)检测 | 第27页 |
| 2.13 绵羊精原干细胞的收集 | 第27页 |
| 2.14 绵羊精原干细胞活率、凋亡率检测 | 第27页 |
| 2.15 绵羊精原干细胞凋亡染色 | 第27-28页 |
| 2.16 细胞周期和细胞凋亡关键基因mRNA水平的检测 | 第28-30页 |
| 2.16.1 引物设计 | 第28页 |
| 2.16.2 精原干细胞总RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.16.3 总RNA质量的鉴定 | 第29页 |
| 2.16.4 cDNA的合成 | 第29页 |
| 2.16.5 qRT-PCR | 第29-30页 |
| 2.17 细胞周期和凋亡关键蛋白检测 | 第30页 |
| 3 数据处理与统计分析 | 第30-32页 |
| 结果与分析 | 第32-48页 |
| 1 绵羊睾丸组织形态观察及PLZF染色效果 | 第32页 |
| 2 绵羊精原干细胞的分离 | 第32-34页 |
| 3 差异贴壁纯化前后绵羊精原干细胞纯度的比较 | 第34页 |
| 4 硒对绵羊精原干细胞体外生长的影响 | 第34-35页 |
| 5 培养96h后绵羊精原干细胞PLZF鉴定结果 | 第35-37页 |
| 6 硒对绵羊精原干细胞细胞活力、凋亡的影响 | 第37-38页 |
| 7 硒对绵羊精原干细胞增殖的影响 | 第38-39页 |
| 8 硒对氧自由基(ROS)水平的影响 | 第39-40页 |
| 9 不同硒浓度下绵羊精原干细胞凋亡染色结果 | 第40-41页 |
| 10 硒对绵羊精原干细胞周期和凋亡相关基因表达的影响 | 第41-46页 |
| 10.1 内参基因18S和细胞周期及凋亡基因的扩增曲线及熔解曲线 | 第41-43页 |
| 10.2 不同处理组绵羊精原干细胞内P21、P27、CyclinB1、CDK1 mRNA的表达差异 | 第43-45页 |
| 10.3 不同处理组绵羊精原干细胞内P53、Bax、Bcl-2、Caspase3/8 mRNA的表达差异 | 第45-46页 |
| 11 硒对细胞周期和凋亡关键蛋白表达水平的影响 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 在读期间研究成果及获奖情况 | 第60-62页 |
| Abstract | 第62-63页 |
| 致谢 | 第64页 |
