摘要 | 第1-4页 |
ABSTRACT | 第4-8页 |
前言 | 第8-9页 |
第1章 文献综述 | 第9-13页 |
1 毛囊与羊绒毛性状 | 第9页 |
2 羊绒毛性状的主要候选基因 | 第9-13页 |
·BMP基因家族 | 第9-10页 |
·Hox基因家族 | 第10页 |
·FGFs | 第10-11页 |
·胰岛素样生长因子 | 第11页 |
·GSDMA | 第11-13页 |
第2章 藏系绵羊GSDMA基因的克隆与表达载体的构建 | 第13-24页 |
1 实验材料 | 第13-15页 |
·样品的采集与处理 | 第13-14页 |
·主要试剂与仪器 | 第14-15页 |
2 实验方法 | 第15-18页 |
·总RNA的提取与PCR扩增 | 第15页 |
·基因的克隆测序及双酶切引物设计 | 第15-16页 |
·含酶切位点GSDMA基因和pCDsRed2-KI载体的扩增 | 第16页 |
·皮肤特异表达载体pCDsR-KG的构建 | 第16-18页 |
·pCDsR-KG载体的鉴定 | 第18页 |
3 结果与分析 | 第18-23页 |
·藏系绵羊GSDMA基因的PCR扩增 | 第18-19页 |
·GSDMA的基因克隆 | 第19-20页 |
·测序及分析 | 第20-21页 |
·GSDMA基因扩增和真核载体的转化 | 第21-22页 |
·pCDsRed2-KG真核载体的鉴定 | 第22-23页 |
4.讨论 | 第23-24页 |
第3章 GSDMA基因真核载体的转染及功能分析 | 第24-39页 |
1 实验材料 | 第24-25页 |
·样品 | 第24-25页 |
·主要试剂与仪器 | 第25页 |
2 实验方法 | 第25-31页 |
·HHIRSC细胞的复苏与传代 | 第25-26页 |
·转染条件优化 | 第26-27页 |
·pCDsR-KG载体的转染与筛选 | 第27页 |
·流式细胞术筛选转染细胞 | 第27页 |
·筛选后细胞RNA及总蛋白的获得 | 第27-28页 |
·GSDMA及 β-catenin基因荧光定量PCR分析 | 第28-30页 |
·Western blot分析 β-catenin蛋白表达差异 | 第30-31页 |
3 结果与分析 | 第31-37页 |
·转染条件优化 | 第31页 |
·转染结果分析 | 第31-32页 |
·流式细胞术筛选转染细胞 | 第32-34页 |
·实验细胞RNA及总蛋白的获得 | 第34页 |
·GSDMA及 β-catenin基因的定量 | 第34-36页 |
·β-catenin基因的蛋白水平分析 | 第36-37页 |
4 讨论 | 第37-39页 |
结论 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-47页 |
附录 | 第47-48页 |
致谢 | 第48-49页 |