| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-30页 |
| 第一节 抑制素的研究 | 第16-24页 |
| 1 抑制素的发现 | 第16页 |
| 2 抑制素的分子结构及理化特性 | 第16-17页 |
| 3 抑制素的来源及其免疫原性 | 第17-18页 |
| 4 抑制素主要生理功能 | 第18-19页 |
| 5 抑制素基因的表达和调控 | 第19-20页 |
| 6 抑制素基因的免疫 | 第20-21页 |
| 7 抑制素免疫在羊繁殖中的应用 | 第21-22页 |
| 8 抑制素免疫的应用前景 | 第22-24页 |
| 第二节RNAI的研究进展 | 第24-27页 |
| 1 RNAi的发展史 | 第24页 |
| 2 RNAi的分子生物学机制及特征 | 第24-25页 |
| 3 sh RNA的设计原则 | 第25页 |
| 4 si RNA的制备方法 | 第25-26页 |
| 5 RNAi抑制INHA基因的研究 | 第26-27页 |
| 第三节 也木勒白羊介绍 | 第27-29页 |
| 1 也木勒白羊主要概况 | 第27页 |
| 2 品种特征 | 第27页 |
| 3 生产性能 | 第27-28页 |
| 4 存在的问题 | 第28-29页 |
| 第四节 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 也木勒白羊卵泡抑制素Α亚基基因克隆及序列分析 | 第30-43页 |
| 摘要 | 第30页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·实验动物样本的采集 | 第31页 |
| ·宿主菌与载体 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| ·主要试剂配制 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-39页 |
| ·PCR引物的设计 | 第33页 |
| ·也木勒白羊羊卵巢组织总RNA的提取与c DNA制备 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR扩增也木勒白羊卵巢总RNA | 第34-35页 |
| ·RT-PCR结果的电泳检测 | 第35页 |
| ·RT-PCR产物的克隆 | 第35-38页 |
| ·序列测定及分析 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| ·总RNA的分离 | 第39页 |
| ·也木勒白羊卵泡抑制素α亚基基因编码区的克隆 | 第39-40页 |
| ·也木勒白羊卵泡抑制素α亚基基因基本信息和序列分析 | 第40-41页 |
| ·同源性序列分析 | 第41页 |
| ·同源性进化树分析 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 也木勒白羊卵泡抑制素Α亚基基因真核表达载体的构建 | 第43-53页 |
| 摘要 | 第43页 |
| 前言 | 第43页 |
| 1 材料 | 第43-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要溶液配制 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-50页 |
| ·也木勒白羊INHα亚基蛋白表达片段的克隆 | 第45-46页 |
| ·也木勒白羊INHα亚基基因绿色荧光真核表达载体的构建 | 第46-50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·重组质粒的PCR、酶切和测序鉴定 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR和Western Blot鉴定重组质粒在真核细胞中表达 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 也木勒白羊卵泡抑制素Α亚基基因疫苗对家兔生殖激素的影响 | 第53-61页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 前言 | 第53-54页 |
| 1 材料 | 第54页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·实验试剂及用具 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-56页 |
| ·抽提PEGFP-INHα质粒 | 第54页 |
| ·免疫原制备 | 第54-55页 |
| ·免疫程序与方法 | 第55页 |
| ·采血方法和时间间隔 | 第55页 |
| ·抗抑制素抗体的检测 | 第55页 |
| ·激素测定 | 第55页 |
| ·统计分析 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-57页 |
| ·抗抑制素抗体检测 | 第56页 |
| ·生殖激素检测 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| ·抑制素基因免疫家兔的应答反应 | 第57-58页 |
| ·抑制素基因免疫对家兔生殖激素的影响 | 第58-59页 |
| ·佐剂对基因免疫的影响 | 第59页 |
| ·重组质粒p EGFP-INHa质粒生物安全评价 | 第59-61页 |
| 第五章 也木勒白羊卵泡抑制素Α亚基基因SIRNA真核表达载体的构建 | 第61-73页 |
| 摘要 | 第61页 |
| 前言 | 第61-62页 |
| 1 材料 | 第62页 |
| ·菌株、细胞和载体 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要溶液配制 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-68页 |
| ·也木勒白羊抑制素α亚基基因靶向Si RNA重组质粒的构建 | 第62-65页 |
| ·也木勒白羊卵泡颗粒细胞的分离与培养及重组质粒的转染 | 第65-66页 |
| ·Q-PCR引物的设计与合成 | 第66-67页 |
| ·si RNA质粒干扰效果的检测 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-71页 |
| ·si RNA表达载体的酶切鉴定结果 | 第68-69页 |
| ·颗粒细胞分离培养 | 第69页 |
| ·两质粒共转颗粒细胞检测干扰情况 | 第69-70页 |
| ·INHα荧光定量Q-PCR检测 | 第70-71页 |
| ·INHα蛋白检测 | 第71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 全文总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87页 |
