| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| ·花生四烯酸的研究进展 | 第8-13页 |
| ·花生四烯酸的主要来源与广泛分布 | 第8-9页 |
| ·花生烯烯酸的主要功能 | 第9-11页 |
| ·花生四烯酸市场前景 | 第11-13页 |
| ·脂肪酸脱氢酶研究现状 | 第13-17页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的特征及分类 | 第13-14页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的结构 | 第14-15页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的分子生物学研究 | 第15-17页 |
| ·酵母表达系统的研究进展 | 第17-21页 |
| ·典型酵母表达系统 | 第17-20页 |
| ·影响酵母表达外源蛋白的因素 | 第20-21页 |
| ·本课题研究目的与意义 | 第21页 |
| ·本课题主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的克隆以及分析 | 第22-34页 |
| ·实验材料及方法 | 第22-28页 |
| ·菌株诱变与克隆载体制备 | 第22-23页 |
| ·实验试剂 | 第23页 |
| ·培养基及溶液的配置 | 第23-24页 |
| ·主要仪器与设备 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·深黄被孢霉中分离提取 RNA | 第25页 |
| ·创建无 Rnase 体系 | 第25页 |
| ·提取深黄被孢霉 RNA | 第25页 |
| ·合成△5 脂肪酸脱氢酶基因 cDNA | 第25-26页 |
| ·扩增深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因 | 第26页 |
| ·RNA 琼脂糖电泳分析鉴定基因 PCR 产物 | 第26页 |
| ·回收、分离纯化目标基因 | 第26-27页 |
| ·连接目标脱氢酶基因 | 第27页 |
| ·构建大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第27页 |
| ·目的基因连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·分离提取目标基因重组质粒 | 第28页 |
| ·△5 脂肪酸脱氢酶重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·分离提取深黄被孢霉总 RNA | 第28-29页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·目的基因重组质粒的 PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·目的基因重组质粒的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒目的基因的测序分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因酵母中的表达 | 第34-46页 |
| ·实验材料与方法 | 第34-36页 |
| ·菌株制备及质粒获取 | 第34-35页 |
| ·工具酶和试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·培养基和溶剂 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-39页 |
| ·重组质粒及表达载体的双酶切 | 第36页 |
| ·回收与纯化△5 脂肪酸脱氢酶基因与表达载体 | 第36页 |
| ·制备重组表达质粒 | 第36页 |
| ·连接产物转移至大肠杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的分析鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒转化并表达于酵母菌细胞 | 第36页 |
| ·分离筛选及鉴定重组毕赤酵母 SMD1168 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析及 Western bloting 鉴定分析 | 第37-38页 |
| ·重组酵母工程菌株 ARA 生产能力的验证 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·pGAPZαA 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·酶切鉴定分析结果 | 第39-40页 |
| ·重组毕赤酵母 SMD1168 基因组的 PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析及 Western bloting 鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组酵母菌产花生四烯酸能力的测试 | 第41-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-48页 |
| ·结论 | 第46页 |
| ·创新点 | 第46页 |
| ·展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |
| 个人简历 | 第56页 |
