| 英文缩略词表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一部分 匹诺塞林生物合成相关基因的克隆功能鉴定及工程菌的构建 | 第14-95页 |
| 第一章 前言 | 第14-23页 |
| ·匹诺塞林生物合成途径 | 第14-16页 |
| ·匹诺塞林生物生物活性 | 第16-18页 |
| ·匹诺塞林的制备方法 | 第18-19页 |
| ·匹诺塞林的化学合成 | 第18页 |
| ·匹诺塞林的植物提取 | 第18-19页 |
| ·匹诺塞林的生物合成 | 第19页 |
| ·提高合成生物学法合成匹诺塞林的策略 | 第19-21页 |
| ·匹诺塞林生物合成的意义 | 第21-22页 |
| ·虎眼万年青中匹诺塞林相关基因克隆鉴定意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·主要仪器设备及生产厂家 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·标准品及常用试剂 | 第24-25页 |
| ·常见溶液配方 | 第25-27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·抗生素的配制 | 第27页 |
| ·试剂盒及酶等生化试剂 | 第27-28页 |
| ·菌株及质粒 | 第28页 |
| ·常用实验方法 | 第28-33页 |
| ·感受态制备方法(CaCl_2法) | 第28页 |
| ·克隆载体连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28-29页 |
| ·重组子的筛选 | 第29页 |
| ·重组蛋白的诱导 | 第29-30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30页 |
| ·蛋白染色 | 第30页 |
| ·蛋白纯化、透析及冷干 | 第30-31页 |
| ·Western-Blot方法 | 第31-32页 |
| ·密码子优化 | 第32页 |
| ·匹诺塞林工程菌的构建及发酵 | 第32-33页 |
| 第三章 对香豆酸辅酶A连接酶功能鉴定 | 第33-43页 |
| 引言 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·虎眼万年青转录组测序及序列分析 | 第33页 |
| ·虎眼万年青全cDNA合成及Osa4CL的克隆 | 第33-34页 |
| ·表达载体构建 | 第34页 |
| ·重组Osa4CL蛋白表达和检测 | 第34页 |
| ·Osa4CL蛋白酶功能鉴定 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-42页 |
| ·生物信息学分析 | 第35-39页 |
| ·重组蛋白的诱导表达检测 | 第39-40页 |
| ·Osa4CL家族的功能鉴定 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 查尔酮合酶和查尔酮异构酶的克隆、功能鉴定 | 第43-68页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-50页 |
| ·OsaCHS和OsaCHI克隆及表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的诱导表达、纯化及Western-Blot检测 | 第45页 |
| ·OsaCHS蛋白家族酶功能鉴定 | 第45-49页 |
| ·酶促反应法 | 第45-46页 |
| ·构建匹诺塞林工程菌法 | 第46-49页 |
| ·OsaCHI蛋白酶功能鉴定 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-66页 |
| ·OsaCHS和OsaCHI生物信息学分析 | 第50-54页 |
| ·OsaCHS和OsaCHI诱导表达和Western-Blot检测 | 第54-55页 |
| ·OsaCHS功能鉴定 | 第55-65页 |
| ·体外酶促反应鉴定法 | 第55-57页 |
| ·构建工程菌法 | 第57-65页 |
| ·OsaCHI功能鉴定 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 匹诺塞林工程菌的构建及优化 | 第68-79页 |
| 引言 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-74页 |
| ·发酵产物定量 | 第69页 |
| ·关键酶物种选择和模块化组装 | 第69-72页 |
| ·关键酶物种选择 | 第69页 |
| ·模块化组装 | 第69-72页 |
| ·密码子优化 | 第72-74页 |
| ·实验结果 | 第74-77页 |
| ·匹诺塞林标准曲线绘制 | 第74-75页 |
| ·关键酶模块化组装 | 第75-76页 |
| ·密码子优化 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第六章 全文总结 | 第79-82页 |
| ·主要内容和意义 | 第79-81页 |
| ·关键酶Osa4CL、OsaCHS和OsaCHI基因家族的克隆与表达 | 第79页 |
| ·关键酶Osa4CL、OsaCHS和OsaCHI蛋白家族的功能鉴定 | 第79-80页 |
| ·(2S)-匹诺塞林工程菌优化 | 第80-81页 |
| ·本论文创新点 | 第81页 |
| ·工作展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 附录 | 第88-95页 |
| 附图 | 第88-94页 |
| 附表 | 第94-95页 |
| 第二部分 来源于虎眼万年青的法呢基焦磷酸合酶基因的克隆、表达及功能鉴定 | 第95-111页 |
| 第一章 前言 | 第95-96页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第96-97页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·标准品及底物 | 第96页 |
| ·生化试剂和酶 | 第96页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·本实验涉及溶液配方和操作 | 第96-97页 |
| 第三章 实验方法 | 第97-100页 |
| ·虎眼万年青转录组测序、序列分析及生物信息学分析 | 第97页 |
| ·OsaFPPS的基因克隆 | 第97-98页 |
| ·OsaFPPS的大肠杆菌表达载体构建 | 第98-99页 |
| ·OsaFPPS的表达、Western-Blot法验证及纯化 | 第99页 |
| ·OsaFPPS功能的鉴定 | 第99-100页 |
| 第四章 实验结果 | 第100-107页 |
| ·OsaFPPS基因的生物信息学分析及克隆 | 第100-103页 |
| ·生物信息学分析 | 第100-102页 |
| ·OsaFPPS的克隆 | 第102-103页 |
| ·OsaFPPS表达载体构建、表达、Western-Blot法验证及纯化 | 第103-104页 |
| ·OsaFPPS表达载体构建、表达及验证 | 第103页 |
| ·OsaFPPS纯化 | 第103-104页 |
| ·OsaFPPS功能鉴定 | 第104-107页 |
| 第五章 实验讨论 | 第107-108页 |
| 第六章 全文总结 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 个人简介 | 第113-114页 |
