| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第1章 前言 | 第8-18页 |
| ·RNAi的发现 | 第8页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第8-9页 |
| ·诱导型RNAi的应用 | 第9-11页 |
| ·疾病的基因治疗 | 第9-10页 |
| ·疾病模型、发病机理的探索 | 第10-11页 |
| ·药物研究的应用 | 第11页 |
| ·诱导型RNAi应用中存在的问题 | 第11-13页 |
| ·干扰素反应 | 第11-12页 |
| ·脱靶效应 | 第12页 |
| ·饱和现象及其他毒性作用 | 第12-13页 |
| ·诱导型RNAi技术的发展 | 第13-16页 |
| ·shRNA骨架的发展 | 第13-14页 |
| ·Tet诱导调控系统的介绍 | 第14-15页 |
| ·Tet-on系统的发展 | 第15-16页 |
| ·本课题研究意义 | 第16页 |
| ·本课题研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第18-31页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·Western blots试剂配制 | 第18页 |
| ·药物和其他试剂 | 第18-19页 |
| ·仪器 | 第19页 |
| ·载体的构建 | 第19-25页 |
| ·TetON3G型反向诱导表达骨架载体的构建 | 第19-20页 |
| ·三种miRNA骨架的shRNA载体的构建 | 第20-21页 |
| ·内含子插入的三种shRNA骨架的载体的构建 | 第21页 |
| ·TetON3G型反向诱导表达Ago2/c Ago2质粒的构建 | 第21-22页 |
| ·pTRIPz骨架的正向诱导表达c Ago2载体的构建 | 第22页 |
| ·正向诱导的不同启动子及反式作用因子的载体的构建 . | 第22-23页 |
| ·pLVX-TetO6-RFP-EF1a-rt TA3-P2A载体的构建 | 第23-24页 |
| ·pTRIPz骨架的不同反式作用因子启动子载体的构建 | 第24-25页 |
| ·细胞培养及质粒转染 | 第25-31页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·质粒转染 | 第25-31页 |
| ·三种miRNA骨架的shRNA载体的转染 | 第25-27页 |
| ·内含子插入的三种 mi RNA 骨架的 sh RNA 质粒的转染 | 第27页 |
| ·Tet ON3G 型反向诱导表达 Ago2/c Ago2 质粒的转染 | 第27-29页 |
| ·pTRIPz骨架的正向诱导表达c Ago2载体的转染 | 第29页 |
| ·正向诱导的不同启动子及反式作用因子的质粒的转染 | 第29页 |
| ·pLVX-TetO6-RFP-EF1a-rt TA3-P2A质粒的转染 | 第29页 |
| ·pTRIPz骨架的不同反式作用因子启动子的载体的转染 | 第29页 |
| ·pTRIPz骨架的CMV、PGK、Ubc反式作用因子启动子功效的定量分析 | 第29-31页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第31-39页 |
| ·三种shRNA骨架对基因沉默效果的影响 | 第31-32页 |
| ·内含子插入的三种shRNA骨架的基因沉默效果 | 第32页 |
| ·TetON3G型反向诱导表达的Ago2/c Ago2 | 第32-33页 |
| ·pTRIPz载体骨架的正向诱导表达的c Ago2 | 第33-34页 |
| ·不同启动子和反式作用因子对载体诱导效率的影响 | 第34页 |
| ·不同连接肽对载体诱导效率的影响 | 第34-35页 |
| ·不同反式作用因子启动子和诱导方向对载体诱导效率的影响 | 第35-37页 |
| ·不同反式作用因子启动子对载体诱导效率影响的定量分析 30 | 第37-39页 |
| 第4章 讨论 | 第39-43页 |
| ·RNAi系统中shRNA骨架的优化 | 第39页 |
| ·内含子插入在TetON3G型反向诱导系统中的功能 | 第39-40页 |
| ·正反向四环素诱导系统c Ago2表达水平验证 | 第40页 |
| ·四环素诱导系统中表达载体启动子与反式作用因子的优化 | 第40-41页 |
| ·四环素诱导系统中连接肽的选择 | 第41页 |
| ·不同反式作用因子启动子及诱导表达方向对诱导效率的影响 | 第41-43页 |
| 第5章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
