| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·植物开花调控研究的进程 | 第10-13页 |
| ·植物开花的重要调控机制 | 第11页 |
| ·自主开花途径 | 第11页 |
| ·年龄途径 | 第11-12页 |
| ·春化途径 | 第12页 |
| ·光周期途径 | 第12-13页 |
| ·赤霉素途径 | 第13页 |
| ·其它途径 | 第13页 |
| ·乙烯诱导凤梨科植物开花调控的研究进展 | 第13-14页 |
| ·乙烯与生长素相互作用的研究进展 | 第14-15页 |
| ·生长素输出载体PIN基因的研究进展 | 第15-19页 |
| ·生长素极性运输的化学渗透假说 | 第16页 |
| ·生长素输出载体PIN的结构特征 | 第16页 |
| ·生长素输出载体PIN在植物发育过程中的作用 | 第16-18页 |
| ·生长素运输载体蛋白PIN表达调控 | 第18页 |
| ·依赖于生长素参与的器官发育机制 | 第18-19页 |
| ·研究目的及意义 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-43页 |
| ·实验材料及主要试剂 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-43页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN cDNA全长的克隆 | 第21-28页 |
| ·蜻蜓凤梨Total RNA的提取 | 第21-22页 |
| ·RACE模板的合成 | 第22页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN 5'和3'端片段的获得 | 第22-24页 |
| ·5'和3'条带的回收 | 第24-25页 |
| ·目的条带与PMD-19 T的连接与转化 | 第25页 |
| ·阳性菌落的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·测序 | 第26页 |
| ·生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·蜻蜓凤梨AFPIN编码区序列的克隆 | 第27页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN编码区序列的条带回收 | 第27页 |
| ·目的条带与PMD-19 T的连接与转化及测序 | 第27-28页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN基因的表达特异性分析 | 第28-30页 |
| ·材料处理及取样 | 第28页 |
| ·蜻蜓凤梨各组织中总RNA的提取 | 第28页 |
| ·蜻蜓凤梨第一条链cDNA的合成 | 第28-29页 |
| ·普通PCR检测引物 | 第29-30页 |
| ·标准曲线的制作 | 第30页 |
| ·相对定量的检测 | 第30页 |
| ·数据分析 | 第30页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN表达载体构建及遗传转化 | 第30-36页 |
| ·目的质粒提取 | 第30-31页 |
| ·载体质粒酶切 | 第31-32页 |
| ·酶切的目的条带回收 | 第32页 |
| ·目的条带与表达载体的连接与转化 | 第32页 |
| ·阳性菌落的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第33页 |
| ·农杆菌EHA105菌株感受态的制备 | 第33页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第33页 |
| ·阳性菌落PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·测序 | 第34页 |
| ·拟南芥的种植 | 第34页 |
| ·农杆菌菌液的活化及侵染液的制备 | 第34-35页 |
| ·花序浸染法侵染拟南芥 | 第35页 |
| ·拟南芥阳性苗的筛选 | 第35页 |
| ·GUS染色 | 第35页 |
| ·转基因植株的RNA提取和DNA提取 | 第35-36页 |
| ·RNA反转成cDNA | 第36页 |
| ·PCR鉴定阳性苗 | 第36页 |
| ·表型观察 | 第36页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN启动子克隆、载体构建及功能鉴定 | 第36-43页 |
| ·蜻蜓凤梨基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN基因组DNA的克隆 | 第36-37页 |
| ·AfPIN基因组序列条带的回收 | 第37页 |
| ·AfPIN基因组序列条带与PbackzeroT的连接与转化 | 第37页 |
| ·阳性菌落PCR的鉴定 | 第37页 |
| ·AfPIN基因组序列条带的测序 | 第37页 |
| ·AfPIN基因组序列的比对 | 第37页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN启动子克隆特异引物的设计方法 | 第37页 |
| ·染色体步移PCR原理 | 第37-39页 |
| ·AfPIN启动子条带的回收 | 第39页 |
| ·AfPIN启动子条带与Pbackzero T连接与转化 | 第39-40页 |
| ·阳性菌落PCR的鉴定 | 第40页 |
| ·AfPIN启动子的测序 | 第40页 |
| ·AfPIN启动子序列的分析 | 第40页 |
| ·克隆AfPIN启动子加酶切位点的序列 | 第40-41页 |
| ·AfPIN启动子连接Pbackzero-T以及转化 | 第41页 |
| ·阳性菌落PCR的鉴定 | 第41页 |
| ·AfPIN启动子连接Pbackzero-T测序 | 第41页 |
| ·AfPIN启动子连接Pbackzero-T质粒的提取 | 第41页 |
| ·AfPIN启动子连接Pbackzero-T质粒的酶切 | 第41-42页 |
| ·AfPIN启动子目的条带的回收 | 第42页 |
| ·AfPIN启动子与表达载体的连接 | 第42页 |
| ·阳性菌落PCR及质粒酶切的鉴定 | 第42页 |
| ·AfPIN启动子连接表达载体的质粒转化农杆菌 | 第42页 |
| ·GUS瞬时表达检测 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-60页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN cDNA全长的获得 | 第43-46页 |
| ·蜻蜓凤梨根、茎尖、心叶总RNA的提取 | 第43页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN基因的克隆及编码区序列全长的获得 | 第43-44页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的生物信息学分析 | 第44-46页 |
| ·阅读框、序列理化性质预测分析 | 第44页 |
| ·同源性比对和保守结构域预测及基因结构分析 | 第44-45页 |
| ·AfPIN基因家族系统进化树分析 | 第45-46页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的表达特性分析 | 第46-51页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN荧光定量标准曲线的制作 | 第46-48页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的昼夜节律表达特性分析 | 第48-49页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的组织特异性表达分析 | 第49-50页 |
| ·乙烯诱导的蜻蜓凤梨组织特异性表达分析 | 第50-51页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的表达载体构建及转基因功能鉴定 | 第51-54页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN表达载体构建及农杆菌转化 | 第51-52页 |
| ·转35S::AfPIN拟南芥植株的分子验证 | 第52-53页 |
| ·转35S::AfPIN植株GUS检测 | 第53页 |
| ·转35::AfPIN拟南芥的表型分析 | 第53-54页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN启动子克隆及功能鉴定 | 第54-60页 |
| ·蜻蜓凤梨基因组DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·蜻蜓凤梨AJPIN基因组的克隆及序列分析 | 第55-56页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN 5'上游调控序列的克隆 | 第56-57页 |
| ·AfPIN-P启动子序列分析及其顺式作用元件的预测 | 第57-58页 |
| ·构建AfPIN-P启动子连接GUS基因的表达载体及功能鉴定 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-65页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN cDNA全长的获得 | 第60页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的表达特性分析 | 第60-62页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN植物表达载体构建及功能分析 | 第62-63页 |
| ·蜻蜓凤梨AfPIN的启动子克隆及功能鉴定 | 第63-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 6 下一步工作计划 | 第66-67页 |
| 文献 | 第67-76页 |
| 英文缩略词 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
