| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 引言 | 第15-19页 |
| 第一部分 结肠癌组织相关候选miRNA的筛选与验证 | 第19-32页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·常用试剂及溶液配制 | 第20-21页 |
| ·标本 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-25页 |
| ·miRNA表达谱筛选结肠癌组织和癌旁组织差异表达miRNA分子 | 第21-23页 |
| ·实时定量逆转录PCR对结肠癌组织和癌旁组织中miR-145、miR-143和miR-96进行检测 | 第23-25页 |
| ·数据处理及统计学分析 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-29页 |
| ·RNA完整性(RIN)检测 | 第25页 |
| ·miRNA表达谱芯片筛选结肠癌相关候选miRNA分子 | 第25-27页 |
| ·实时定量RT-PCR对差异表达的miR-145、miR-143、miR-96进行验证 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖电泳检测实时定量RT-PCR产物 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-32页 |
| 第二部分 miR-145体外抑制结肠癌细胞HCT116增殖的实验研究 | 第32-50页 |
| ·材料 | 第32-36页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·常用试剂及溶液配制 | 第34-36页 |
| ·方法 | 第36-42页 |
| ·pCMV-miR-145质粒载体的构建与鉴定 | 第36-41页 |
| ·细胞培养及转染 | 第41页 |
| ·实时定量RT-PCR检测重组表达载体pCMV-miR-145过表达miR-145的能力 | 第41-42页 |
| ·CCK8检测过表达miR-145对结肠癌细胞HCT116增殖速度的影响 | 第42页 |
| ·流式细胞仪检测过表达miR-145对结肠癌细胞HCT116细胞周期进程的影响 | 第42页 |
| ·细胞划痕实验检测过表达miR-145对结肠癌细胞HCT116迁移能力的影响 | 第42页 |
| ·数据处理及统计学分析 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-48页 |
| ·PCR扩增包含hsa-miR-145完全前体序列产物的琼脂糖电泳图 | 第42页 |
| ·包含has-miR-145完全前体序列的T载体测序图 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pCMV-miR-145的酶切及鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pCMV-miR-145在HCT116细胞中表达miR-145的能力检测 | 第44页 |
| ·CCK8实验检测转染过表达miR-145对HCT116细胞增殖速度的影响 | 第44-45页 |
| ·流式细胞仪检测转染过表达miR-145对HCT116细胞周期进程的影响 | 第45-46页 |
| ·细胞划痕实验检测过表达miR-145对HCT116细胞迁移能力的影响 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第三部分 miR-145抑制裸鼠皮下移植瘤的实验研究 | 第50-54页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·常用试剂及溶液配制 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·细胞培养、载体构建、转染等 | 第51页 |
| ·裸鼠致瘤实验 | 第51-52页 |
| ·数据处理及统计学分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第四部分 miR-145抑制结肠癌细胞HCT116增殖机制的研究 | 第54-74页 |
| ·材料 | 第54-58页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·常用试剂及溶液配制 | 第56-58页 |
| ·方法 | 第58-65页 |
| ·生物信息学分析寻找miR-145的下游靶基因 | 第58页 |
| ·荧光素酶活性检测验证SOX9为miR-145的下游靶基因 | 第58-61页 |
| ·Western blot验证SOX9为miR-145靶向调节靶基因 | 第61-63页 |
| ·RT-PCR检测SOX9及其下游基因MUC2的mRNA水平 | 第63-64页 |
| ·Western blot检测结肠癌组织和癌旁组织中SOX9和MUC2 | 第64页 |
| ·数据处理及统计学分析 | 第64-65页 |
| ·结果 | 第65-71页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第65页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第65-67页 |
| ·miR-145对SOX9及下游基因的调节 | 第67页 |
| ·实时定量RT-PCR检测结肠癌组织与癌旁组织中miR-145、SOX9及下游 | 第67-68页 |
| 基因MUC2的表达 | 第68-70页 |
| ·Western blotting检测结肠癌组织和癌旁组织中SOX9和下MUC2 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 结语 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-101页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
