| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 前言 | 第11-12页 |
| 2 启动子概述 | 第12-14页 |
| ·启动子的分类 | 第12-13页 |
| ·启动子的克隆和研究方法 | 第13-14页 |
| 3 动物转基因技术 | 第14-16页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·动物转基因技术在畜牧生产中的应用 | 第14页 |
| ·动物转基因技术在畜牧业中的发展前景 | 第14-16页 |
| 4 TTR的研究现状 | 第16页 |
| 5 纤维素酶的概述 | 第16-17页 |
| 6 BGL1的概述 | 第17-18页 |
| 7 研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-44页 |
| 1 试验材料 | 第20-23页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·载体和菌株 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂的配置 | 第21-22页 |
| ·用于基因组DNA提取的溶液配制 | 第21-22页 |
| ·用于蛋白Western Blot检测的溶液配制 | 第22页 |
| ·主要生物学软件 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-44页 |
| ·转基因小鼠制备、建系及基因型鉴定 | 第23-26页 |
| ·转基因鼠的获得 | 第23页 |
| ·转基因小鼠的建系 | 第23-24页 |
| ·转基因鼠基因型鉴定 | 第24-26页 |
| ·转基因鼠后代遗传稳定性 | 第26页 |
| ·转基因小鼠拷贝数的鉴定 | 第26-29页 |
| ·转基因鼠基因组DNA提取 | 第26页 |
| ·单拷贝内参基因的选择 | 第26-27页 |
| ·标准品的制备 | 第27页 |
| ·Q-PCR反应及标准曲线的绘制 | 第27-28页 |
| ·重复性及稳定性的测定 | 第28页 |
| ·BGL1基因拷贝数的计算 | 第28-29页 |
| ·外源基因BGL1在转基因小鼠体内的表达检测 | 第29-33页 |
| ·m RNA水平检测 | 第29-32页 |
| ·蛋白水平检测外源基因的表达 | 第32-33页 |
| ·猪TTR基因启动子的肝脏特异性验证 | 第33-34页 |
| ·转基因鼠各组织蛋白的提取 | 第33页 |
| ·Western Blot检测BGL1的表达 | 第33-34页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力的测定 | 第34-35页 |
| ·转基因小鼠表型的鉴定 | 第35-36页 |
| ·肝脏重量指数 | 第35页 |
| ·肝脏组织细胞形态学分析 | 第35页 |
| ·肝脏组织胶原纤维含量分析 | 第35页 |
| ·生长曲线 | 第35-36页 |
| ·抗体制备 | 第36-44页 |
| ·重组表达载体pET-21a(+)-BGL1的构建 | 第36-40页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第40-41页 |
| ·抗体的制备 | 第41-42页 |
| ·效价的测定 | 第42-43页 |
| ·抗血清的纯化 | 第43页 |
| ·抗体的Western Blot分析 | 第43页 |
| ·抗体在Western Blot检测中的应用 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-64页 |
| 1 转基因小鼠的获得、建系及基因型鉴定 | 第44-48页 |
| ·转基因鼠的获得 | 第44页 |
| ·转基因小鼠的建系及遗传稳定性 | 第44-47页 |
| ·转基因鼠基因型鉴定 | 第47-48页 |
| 2 外源基因拷贝数鉴定 | 第48-50页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第48页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第48-49页 |
| ·拷贝数浓度的计算 | 第49-50页 |
| 3 外源基因BGL1在转基因小鼠体内的表达检测 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR技术检测BGL1基因在m RNA水平上的表达 | 第50页 |
| ·Western Blot检测BGL1蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 4 猪TTR基因启动子的肝脏特异性验证 | 第51-52页 |
| 5 β-葡萄糖苷酶活性的测定 | 第52-53页 |
| 6 转基因小鼠表型的鉴定 | 第53-56页 |
| ·肝脏重量指数 | 第53-54页 |
| ·肝脏组织细胞形态学分析 | 第54页 |
| ·肝脏组织胶原纤维含量分析 | 第54-56页 |
| ·生长曲线 | 第56页 |
| 7 抗体制备 | 第56-64页 |
| ·重组表达载体pET-21a(+)-BGL1的构建 | 第56-58页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第58-60页 |
| ·效价的测定 | 第60-61页 |
| ·抗血清纯化 | 第61-62页 |
| ·抗体的Western Blot分析 | 第62-63页 |
| ·抗体在Western Blot检测中的应用 | 第63-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-69页 |
| 1 制备转基因动物过程中启动子的选择 | 第64-65页 |
| 2 BGL1基因表达产物的分析 | 第65页 |
| 3 转基因小鼠外源基因拷贝数的鉴定 | 第65-67页 |
| 4 信号肽在转基因小鼠中的作用 | 第67页 |
| 5 多克隆抗体的制备 | 第67-69页 |
| 第五章 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 在读期间发表文章情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
