| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 引言 | 第12页 |
| 2 转基因动物的研究进展及制备方法 | 第12-15页 |
| ·转基因动物的研究进展 | 第12-13页 |
| ·转基因动物制备方法 | 第13-15页 |
| 3 启动子的结构及应用 | 第15-16页 |
| 4 肌肉组织的生长发育及调控 | 第16-19页 |
| ·肌纤维的分类 | 第16页 |
| ·肌肉组织在胚胎期的发育 | 第16-17页 |
| ·动物出生后骨骼肌的生长发育 | 第17页 |
| ·肌肉特异性基因Myf6、MyoD和Myoz1对骨骼肌生长发育的调控 | 第17-19页 |
| 5 脂肪组织的形成与调控 | 第19-21页 |
| 6 研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料方法 | 第23-46页 |
| 1 试验材料 | 第23-26页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·载体和质粒 | 第23页 |
| ·主要仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第24页 |
| ·主要溶液的配置 | 第24-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-46页 |
| ·后代阳性转基因鼠的鉴定 | 第26-28页 |
| ·小鼠基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·阳性鼠的鉴定 | 第27-28页 |
| ·转基因鼠基因组外源基因拷贝数的鉴定 | 第28-34页 |
| ·小鼠单拷贝基因重组质粒的构建 | 第28页 |
| ·PCR扩增产物的检测和回收 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的酶切及重组载体的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的转化 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的检测及测序 | 第31页 |
| ·将连接目的片段的p GL3-Basic的重组质粒小量提取 | 第31-32页 |
| ·转基因鼠基因组内拷贝数的鉴定 | 第32-34页 |
| ·转基因鼠目的基因在RNA水平表达情况的验证 | 第34-37页 |
| ·转基因鼠不同组织RNA的提取 | 第34页 |
| ·RNA的反转录 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR分析MyoD转基因鼠不同组织中MyoD基因的表达情况 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量PCR分析PPAR-γ2 转基因鼠及野生型鼠肌肉组织中PPAR-γ2 及下游靶基因的表达情况 | 第36-37页 |
| ·转基因鼠目的基因在蛋白水平表达情况的验证 | 第37-38页 |
| ·转基因鼠与野生型鼠肌肉组织蛋白的提取 | 第37页 |
| ·Western blot检测目的蛋白质的表达量 | 第37-38页 |
| ·转基因鼠肌肉组织免疫组化分析目的蛋白PPAR-γ 的定位和表达情况 | 第38-42页 |
| ·小鼠肌肉组织样品石蜡包埋 | 第38-40页 |
| ·免疫组化操作步骤 | 第40-42页 |
| ·转基因鼠和野生型体重及血常规测定 | 第42页 |
| ·转基因鼠肌肉组织切片分析肌束的生长情况 | 第42-43页 |
| ·切片的制备 | 第42-43页 |
| ·显微镜下观察肌纤维生长状况 | 第43页 |
| ·转基因鼠肌肉组织冷冻切片油红O染色 | 第43-44页 |
| ·转基因鼠肌肉组织甘油三酯的测定 | 第44-45页 |
| ·统计学分析 | 第45-46页 |
| 第三章 PPAR-γ2 转基因鼠的研究结果与分析 | 第46-57页 |
| 1 PPAR-γ2 阳性转基因鼠的鉴定 | 第46-47页 |
| 2 PPAR-γ2 转基因鼠遗传稳定性的鉴定 | 第47页 |
| 3 外源基因在基因组内拷贝数的鉴定 | 第47-51页 |
| ·单拷贝基因Pthlh重组质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·PPAR-γ2 转基因鼠外源基因拷贝数的鉴定 | 第49-51页 |
| 4 PPAR-γ2 转基因鼠与野生型鼠肌肉组织中PPAR-γ2 及下游靶基因的表达分析 | 第51-52页 |
| 5 PPAR-γ2 转基因鼠肌肉组织中PPAR-γ 蛋白的定位 | 第52-53页 |
| 6 PPAR-γ2 转基因鼠表型的鉴定 | 第53-57页 |
| ·PPAR-γ2 转基因鼠与野生型鼠1到 8 周龄体重生长状况 | 第53-54页 |
| ·PPAR-γ2 转基因鼠与野生型鼠血常规的测定 | 第54-55页 |
| ·PPAR-γ2 转基因鼠与野生型鼠肌肉组织油红O染色结果 | 第55-56页 |
| ·PPAR-γ2 转基因鼠与野生型鼠肌肉组织内甘油三酯的测定 | 第56-57页 |
| 第四章 MyoD转基因鼠的研究结果与分析 | 第57-64页 |
| 1 MyoD阳性转基因鼠的鉴定 | 第57-58页 |
| 2 MyoD转基因鼠遗传稳定性的鉴定 | 第58页 |
| 3 MyoD转基因鼠外源基因拷贝数的鉴定 | 第58-60页 |
| 4 MyoD转基因鼠MyoD基因的组织表达谱分析 | 第60页 |
| 5 MyoD转基因鼠肌肉组织中MyoD基因的表达分析 | 第60-61页 |
| 6 MyoD转基因鼠表型的鉴定 | 第61-64页 |
| ·MyoD转基因鼠与野生型鼠1到 8 周龄体重生长状况 | 第61-62页 |
| ·MyoD转基因鼠肌肉组织切片分析肌束的生长情况 | 第62-64页 |
| 第五章 讨论 | 第64-67页 |
| 1 外源基因在转基因鼠基因组内的拷贝数 | 第64页 |
| 2 PPAR-γ2 转基因鼠肌肉组织中PPAR-γ 蛋白的定位 | 第64-65页 |
| 3 PPAR-γ2 转基因鼠肌肉组织中外源基因在RNA和蛋白水平的表达情况 | 第65页 |
| 4 转基因鼠肌肉组织中过表达PPAR-γ2 对下游靶基因的影响 | 第65页 |
| 5 肌肉内脂肪含量影响肉的质量 | 第65-66页 |
| 6 MyoD转基因鼠外源基因的表达情况 | 第66页 |
| 7 MyoD转基因鼠肌纤维生长情况结果分析 | 第66-67页 |
| 第六章 结论 | 第67-69页 |
| 1 本研究取得的成果 | 第67-68页 |
| 2 后期研究设想 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 在读期间发表的文章 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
