| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 上篇 引言 | 第11-21页 |
| 1 我国芒果产业的经济重要性 | 第11页 |
| 2 芒果炭疽病研究进展 | 第11-16页 |
| ·分布与为害 | 第11页 |
| ·症状特点 | 第11-12页 |
| ·病原菌 | 第12页 |
| ·发病规律 | 第12-13页 |
| ·防治 | 第13-14页 |
| ·选用抗病品种 | 第13页 |
| ·农业防治 | 第13页 |
| ·化学防治 | 第13页 |
| ·生物防治 | 第13-14页 |
| ·胶孢炭疽菌分子生物学研究概况 | 第14-16页 |
| 3 漆酶(Laccase)研究进展 | 第16-19页 |
| ·真菌漆酶结构特征 | 第16页 |
| ·真菌漆酶分子遗传研究 | 第16-18页 |
| ·漆酶基因的表达 | 第16-17页 |
| ·植物病原真菌漆酶基因的功能 | 第17-18页 |
| ·真菌漆酶提纯与活性测定方法 | 第18-19页 |
| 4 本研究目的意义、主要研究内容和技术路线 | 第19-21页 |
| ·目的意义 | 第19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 下篇 研究内容 | 第21-73页 |
| 1 材料与方法 | 第21-43页 |
| ·材料与仪器 | 第21-23页 |
| ·供试药剂及试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·供试品种与病原菌 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-43页 |
| ·芒果炭疽病菌漆酶活性分析 | 第23-24页 |
| ·漆酶基因Lac1片段扩增 | 第24-26页 |
| ·SEFA-PCR获得漆酶Lac1基因的DNA全长 | 第26-28页 |
| ·漆酶基因Lac1基因全长cDNA序列的获得 | 第28-30页 |
| ·Lac1基因在不同侵染时段的半定量RT-PCR表达分析 | 第30-31页 |
| ·Lac1基因敲除载体的构建 | 第31-33页 |
| ·Lac1基因敲除 | 第33-35页 |
| ·基因敲除突变体筛选与PCR验证 | 第35-36页 |
| ·突变体Southern杂交分析 | 第36-39页 |
| ·半定量RT-PCR分析突变体△A2LAC1的相关基因表达及基因产物活性测定 | 第39-41页 |
| ·漆酶基因Lac1突变菌株△A2LAC1表型测定 | 第41-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-67页 |
| ·芒果炭疽病菌漆酶活性分析 | 第43-44页 |
| ·芒果炭疽病菌产漆酶平板筛选检测 | 第43页 |
| ·粗漆酶液对A2致病力的影响 | 第43-44页 |
| ·漆酶基因Lac1扩增 | 第44-49页 |
| ·芒果炭疽病菌A2菌株基因组DNA的提取 | 第44页 |
| ·Lac1基因片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·SEFA-PCR扩增获得Lac1基因的DNA全长 | 第45-46页 |
| ·漆酶基因Lac1基因全长cDNA序列的获得 | 第46页 |
| ·漆酶Lac1基因序列分析 | 第46-49页 |
| ·Lac1基因在不同侵染时段的半定量RT-PCR表达分析 | 第49-50页 |
| ·扩增循环数的确定 | 第49-50页 |
| ·表达量分析 | 第50页 |
| ·漆酶基因Lac1基因的敲除 | 第50-54页 |
| ·Lac1基因敲除载体的构建 | 第50-52页 |
| ·Lac1基因的敲除 | 第52页 |
| ·Lac1敲除突变体的筛选与PCR验证 | 第52-53页 |
| ·Lac1突变体△A2LAC1的Southern杂交分析 | 第53-54页 |
| ·突变体△A2LAC1半定量RT-PCR分析和相关酶活及黑色素含量测定 | 第54-57页 |
| ·突变体△A2LAC1的半定量RT-PCR分析 | 第54-55页 |
| ·突变体△A2LAC1酶活和黑色素含量测定 | 第55-57页 |
| ·漆酶Lac1突变体△A2LAC1表型测定 | 第57-67页 |
| ·突变体△A2LAC1对潮霉素抗性的遗传稳定性检测 | 第57页 |
| ·突变体△A2LAC1菌落、菌丝形态观察和生长速率测定 | 第57-58页 |
| ·突变体△A2LAC1产孢量测定及孢子萌发观察 | 第58-59页 |
| ·突变体△A2LAC1生长温度范围的测定 | 第59-60页 |
| ·突变体△A2LAC1菌丝致死温度的测定 | 第60页 |
| ·突变体△A2LAC1对pH敏感性测定 | 第60-61页 |
| ·碳源和氮源对突变体△A2LAC1菌丝生长的影响 | 第61-63页 |
| ·突变体△A2LAC1对高渗胁迫条件的敏感性测定 | 第63-64页 |
| ·突变体△A2LAC1抗氧化能力测定 | 第64页 |
| ·突变体△A2LAC1致病力测定 | 第64-67页 |
| 3 结论与讨论 | 第67-73页 |
| ·主要结论 | 第67-69页 |
| ·初步确定漆酶对芒果炭疽病菌致病力有影响 | 第67-68页 |
| ·获得芒果炭疽病菌漆酶基因Lac1全长序列 | 第68页 |
| ·获得芒果炭疽病菌漆酶基因Lac1敲除突变体 | 第68页 |
| ·漆酶Lac1基因突变体△A2LAC1的表型 | 第68-69页 |
| ·初步分析了漆酶Lac1与其它一些酶活的关系 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·漆酶活性分析 | 第69页 |
| ·漆酶Lac1基因的表达 | 第69页 |
| ·漆酶Lac1基因的表型分析 | 第69-70页 |
| ·漆酶基因家族 | 第70-71页 |
| ·漆酶与致病力的关系 | 第71页 |
| ·漆酶Lac1与其他致病基因的关系 | 第71页 |
| ·本研究创新点 | 第71-72页 |
| ·后续研究 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 缩略词表 | 第84-85页 |
| 附录1 | 第85-89页 |
| 附录2 | 第89-90页 |
| 附录3 | 第90-91页 |
| 攻读硕士期间发表文章情况 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
