| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 图目录 | 第12-13页 |
| 表目录 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-27页 |
| ·凝乳酶的研究现状及发展 | 第14-17页 |
| ·凝乳酶简介 | 第14页 |
| ·凝乳酶的来源 | 第14-17页 |
| ·动物性凝乳酶 | 第14-15页 |
| ·植物性凝乳酶 | 第15-16页 |
| ·微生物源凝乳酶 | 第16-17页 |
| ·基因工程凝乳酶 | 第17页 |
| ·重组凝乳酶的原核表达 | 第17-18页 |
| ·重组凝乳酶的真核表达 | 第18页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第18-20页 |
| ·凝乳酶的结构与凝乳机理 | 第20-24页 |
| ·凝乳酶的结构 | 第20-24页 |
| ·凝乳酶的凝乳机理 | 第24页 |
| ·凝乳酶的物理性质与稳定性 | 第24-25页 |
| ·研究背景及研究内容 | 第25-27页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·实验仪器及材料 | 第27-30页 |
| ·实验常规仪器与设备 | 第27页 |
| ·主要酶和试剂 | 第27页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·菌株 | 第27-28页 |
| ·质粒 | 第28页 |
| ·培养基以及实验所用培养基 | 第28-29页 |
| ·主要引物 | 第29页 |
| ·主要缓冲液 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·SDS碱裂解法制备质粒DNA(小量制备) | 第30页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第30-31页 |
| ·凝胶回收目的DNA片段 | 第31页 |
| ·载体和片段的连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌常规转化 | 第32页 |
| ·大肠杆菌重组子的筛选 | 第32页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·线性化重组表达载体 | 第33页 |
| ·乙醇沉淀法纯化线性化DNA | 第33页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母重组菌株筛选 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第34-35页 |
| ·重组凝乳酶的酶学特性的研究 | 第35-36页 |
| ·测定重组凝乳酶反应的最适pH值 | 第35页 |
| ·测定重组凝乳酶的最适反应温度 | 第35-36页 |
| ·测定重组凝乳酶的热稳定性 | 第36页 |
| ·重组毕赤酵母培养条件的改进 | 第36-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-51页 |
| ·牛凝乳酶原表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·牛凝乳酶原基因的获得 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第38-39页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建过程 | 第39页 |
| ·重组载体pPIC9K-prochy.的验证 | 第39-41页 |
| ·阳性克隆的功能鉴定 | 第41-42页 |
| ·凝乳酶原蛋白表达以及酸化的必要性 | 第42-45页 |
| ·重组牛凝乳酶的活力曲线 | 第45-46页 |
| ·重组凝乳酶的酶活特性 | 第46-50页 |
| ·重组凝乳酶的最适反应pH值 | 第46-47页 |
| ·重组凝乳酶的最适反应温度 | 第47-48页 |
| ·凝乳酶的热稳定性 | 第48-50页 |
| ·商品酶的热稳定性 | 第48-49页 |
| ·KM71/pPIC9K-prochy21重组酶的热稳定性 | 第49页 |
| ·GS115/pPIC9K-prochy32重组酶的热稳定性 | 第49-50页 |
| ·在最优条件下酶活测定 | 第50-51页 |
| 第四部分 结论与展望 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |