脱氨酶AmnE的表达纯化及其结构解析
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·硝基苯概述 | 第8-9页 |
| ·硝基苯的理化性质 | 第8页 |
| ·硝基苯的危害 | 第8-9页 |
| ·环境中硝基苯的来源 | 第9页 |
| ·硝基苯生物降解的研究现状 | 第9-15页 |
| ·硝基苯生物降解途径 | 第10-12页 |
| ·硝基苯生物降解途径中脱氨酶的研究进展 | 第12-15页 |
| ·蛋白质晶体学在生物降解酶研究上的应用 | 第15-19页 |
| ·蛋白质晶体学技术流程 | 第15-18页 |
| ·蛋白质晶体学在生物降解酶上的研究进展 | 第18-19页 |
| ·本课题的研究意义及内容 | 第19-20页 |
| ·研究意义 | 第19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·基因 | 第20页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·表达载体 | 第20页 |
| ·实验耗材 | 第20-21页 |
| ·实验试剂及工具酶 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·主要溶液 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-36页 |
| ·生物信息学分析 | 第24页 |
| ·重组质粒的构建 | 第24-30页 |
| ·脱氨酶AmnE的表达与纯化 | 第30-33页 |
| ·脱氨酶AmnE结晶条件的筛选与优化 | 第33-35页 |
| ·脱氨酶AmnE晶体衍射数据的收集与处理 | 第35页 |
| ·脱氨酶AmnE晶体结构的解析与修正 | 第35-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-50页 |
| ·生物信息学分析 | 第36页 |
| ·重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·脱氨酶AmnE的表达与纯化 | 第38-41页 |
| ·脱氨酶AmnE的小量试表达 | 第38页 |
| ·脱氨酶AmnE的Ni-NTA亲和层析 | 第38-39页 |
| ·脱氨酶AmnE的离子交换层析 | 第39-41页 |
| ·脱氨酶AmnE结晶条件的筛选与优化 | 第41-43页 |
| ·脱氨酶AmnE结晶条件的筛选 | 第41-42页 |
| ·脱氨酶AmnE结晶条件的优化 | 第42-43页 |
| ·脱氨酶AmnE晶体衍射数据的收集与处理 | 第43-45页 |
| ·脱氨酶AmnE晶体的结构解析与修正 | 第45-46页 |
| ·脱氨酶AmnE晶体的结构分析与讨论 | 第46-49页 |
| ·脱氨酶AmnE与底物类似物的共晶 | 第49-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 5 展望 | 第51-52页 |
| 6 参考文献 | 第52-60页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第60-61页 |
| 8 致谢 | 第61页 |
