| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-47页 |
| 1. 蛋白磷酸化和去磷酸化反应 | 第12-17页 |
| ·蛋白磷酸化和蛋白磷酸酶简介 | 第12-14页 |
| ·蛋白磷酸酶PP2A概述 | 第14-15页 |
| ·PP2A结构亚基Aα和Aβ的功能 | 第15-17页 |
| 2. 真核生物基因表达调控 | 第17-25页 |
| ·真核生物基因的基本历史及基本结构 | 第17-21页 |
| ·真核生物的启动子和增强子 | 第21-23页 |
| ·转录因子 | 第23-25页 |
| 3. CREB转录因子 | 第25-36页 |
| ·CREB及其家族成员的结构简介 | 第25-27页 |
| ·CREB转录因子的磷酸化 | 第27-29页 |
| ·CREB转录因子结合DNA的机制研究 | 第29-32页 |
| ·CREB转录激活下游基因的机制 | 第32-35页 |
| ·CREB转录因子的靶基因 | 第35-36页 |
| 4. 癌症和CREB转录因子 | 第36-47页 |
| ·癌症细胞简述 | 第36-37页 |
| ·前列腺癌相关简介 | 第37-39页 |
| ·前列腺癌中的P13K-AKT信号通路 | 第39-41页 |
| ·肿瘤中的CREB转录因子 | 第41-45页 |
| ·前列腺癌与CREB转录因子 | 第45-46页 |
| ·前列腺癌细胞DU145和LNCaP简介 | 第46-47页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第47-73页 |
| 1. 材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-73页 |
| ·DU145和LNCaP细胞的培养 | 第48-49页 |
| ·Lipofectamine2000转染细胞 | 第49-50页 |
| ·单克隆细胞筛选和细胞系的建立 | 第50-51页 |
| ·DU145和LNCaP细胞总RNA的提取 | 第51-53页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第53-54页 |
| ·PCR实验 | 第54-55页 |
| ·过表达PP2A-Aα质粒PCIno-PP2A-Aα的构建 | 第55-56页 |
| ·激光共聚焦定位DU145和LNCaP细胞CREB蛋白表达 | 第56-57页 |
| ·肿瘤细胞伤愈实验 | 第57-58页 |
| ·DU145和LNCaP细胞中CREB蛋白半衰期的检测 | 第58页 |
| ·DU145和LNCaP细胞总蛋白的提取 | 第58-59页 |
| ·Bradford方法测定蛋白质浓度 | 第59-60页 |
| ·蛋白质十二烷基磺酸钠-聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第60-61页 |
| ·蛋白质印迹免疫分析(Western Blot) | 第61-64页 |
| ·DU145和LNCaP细胞核蛋白和胞质蛋白的分别提取 | 第64-65页 |
| ·凝胶迁移阻滞(EMSA)实验方法分析LNCaP核蛋白中CREB蛋白与PP2A-Aα基因启动子序列体外相互作用 | 第65-69页 |
| ·裸鼠实验及数据统计 | 第69-73页 |
| 第三章 实验结果 | 第73-91页 |
| 1. CREB和PP2A-AA在前列腺癌细胞DU145和LNCAP中具有平行相关性 | 第73-74页 |
| 2. CREB和PP2A-AA转录和翻译水平及CREB转录因子胞内定位 | 第74-76页 |
| 3. DU145和LNCAP中CREB半衰期具有差异 | 第76-77页 |
| 4. 人类和小鼠PP2A-AA的启动子上CREB结合位点的差异 | 第77-78页 |
| 5. 凝胶迁移阻滞实验(EMSA)证明PP2A-AA在在LNCAP细胞中受CREB转录因子的调节 | 第78-81页 |
| 6. DU145过表达CREB后磷酸化CREB上调,同时PP2A-AA水平也上调 | 第81-82页 |
| 7. 肿瘤细胞伤愈实验表明DU145-CREB细胞的迁移速率提升 | 第82-83页 |
| 8. DU145-CREB和DU145-PP2A-AA细胞成瘤能力都得到增强 | 第83-85页 |
| 9. PKA-CREB信号途径是负责DU145和LNCAP中磷酸化CREB的主要途径 | 第85-91页 |
| 第四章 讨论展望 | 第91-101页 |
| 1. CREB上游受到多种信号通路调控 | 第91-95页 |
| 2. CREB在DU145和LNCAP中是PP2A-AA的唯一转录因子吗? | 第95-96页 |
| 3. PP2A-AA的表达水平与致瘤性有密切关系 | 第96-99页 |
| 4. DU145过表达PKA-CA以后,DU145细胞中可能的变化 | 第99-101页 |
| 第五章 参考文献 | 第101-138页 |
| 博士学习期间主要论文 | 第138-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
