| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-36页 |
| 1. 引言 | 第11-13页 |
| 2. 蛋白质的可逆磷酸化 | 第13-15页 |
| 3. 蛋白磷酸酶2A(PP2A) | 第15-27页 |
| ·PP2A的结构组成 | 第16-20页 |
| ·PP2A的功能 | 第20-24页 |
| ·PP2A结构亚基A与肿瘤发生 | 第24-27页 |
| 4. 转录因子调控基因表达的研究进展 | 第27-36页 |
| 第二章 蛋白磷酸酶PP2A-Aβ基因启动子的克隆 | 第36-58页 |
| 1 实验材料与仪器试剂 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| ·化学试剂 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-52页 |
| ·基因组DNA(genomic DNA)的提取 | 第37-39页 |
| ·基因启动子的分子克隆 | 第39-42页 |
| ·删除突变质粒的构建 | 第42-46页 |
| ·细胞转染用去内毒素高纯质粒的制备 | 第46-48页 |
| ·脂质体Lipofectamin 2000介导的哺乳动物细胞瞬时转染 | 第48-50页 |
| ·双荧光素酶活性的测定 | 第50-51页 |
| ·数据统计学分析 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-58页 |
| ·克隆小鼠PP2A-Aβ基因启动子序列 | 第52-53页 |
| ·PP2A-Aβ基因启动子5'删除突变质粒的构建 | 第53-56页 |
| ·PP2A-Aβ基因核心启动子区的确定 | 第56-58页 |
| 第三章 PP2A-Aβ基因核心启动子区顺式作用元件的确定 | 第58-101页 |
| 1 实验材料与仪器试剂 | 第58-60页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验仪器 | 第58-59页 |
| ·化学试剂 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-83页 |
| ·软件分析启动子上顺式作用元件 | 第60-61页 |
| ·Western Blot | 第61-67页 |
| ·凝胶迁移滞后实验 | 第67-74页 |
| ·染色质免疫沉降实验 | 第74-83页 |
| ·数据统计学分析 | 第83页 |
| 3. 实验结果 | 第83-101页 |
| ·PP2A-Aβ核心启动子B4区段顺式作用元件的软件预测结果 | 第83-84页 |
| ·Western Blot检测各转录因子在小鼠晶体上皮细αTN4-1中的表达 | 第84-87页 |
| ·凝胶迁移滞后实验检测各转录因子在体外与小鼠PP2A-Aβ基因启动子序列的相互结合 | 第87-94页 |
| ·染色质免疫沉降分析检测各转录因子在体内与小鼠PP2A-Aβ基因启动子序列的相互结合 | 第94-101页 |
| 第四章 各转录因子对PP2A-Aβ基因启动子的调控作用 | 第101-124页 |
| 1 实验材料与仪器试剂 | 第102-103页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·实验仪器 | 第102页 |
| ·化学试剂 | 第102-103页 |
| 2 实验方法 | 第103-111页 |
| ·定点突变质粒的构建 | 第103-105页 |
| ·双荧光素酶活性的测定 | 第105页 |
| ·过表达稳定克隆细胞系的建立 | 第105-107页 |
| ·总RNA的提取 | 第107-109页 |
| ·反转录cDNA第一条链的获得 | 第109页 |
| ·Real-time Quantitative PCR | 第109-111页 |
| ·Western Blot | 第111页 |
| ·数据统计学分析 | 第111页 |
| 3 实验结果 | 第111-118页 |
| ·各转录因子结合位点定点突变后的PP2A-Aβ基因核心启动子区荧光素酶活性分析结果 | 第111-113页 |
| ·共转染各转录因子表达质粒后PP2A-Aβ基因核心启动子区荧光素酶活性分析结果 | 第113-115页 |
| ·Real-time PCR检测各转录因子对PP2A-Aβ基因RNA水平的调控作用 | 第115-118页 |
| ·Western Blot检测各转录因子对PP2A-Aβ基因蛋白水平的调控作用 | 第118-124页 |
| 第五章 讨论 | 第124-134页 |
| 1 PP2A结构亚基PP2A-Aα和PP2A-Aβ调控存在差异 | 第125-127页 |
| 2 转录因子Ets-1在调节基因表达中的作用 | 第127-128页 |
| 3 Sp1/Sp3调节基因表达时的双重作用 | 第128-130页 |
| 4 视黄素受体RXR与抗癌作用 | 第130-132页 |
| 5 展望 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-145页 |
| 研究生学习期间撰写、发表的主要论文 | 第145-148页 |
| 致谢 | 第148-150页 |
