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蛋白磷酸酶PP2A-Aβ基因启动子的克隆及功能研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第一章 前言第11-36页
 1. 引言第11-13页
 2. 蛋白质的可逆磷酸化第13-15页
 3. 蛋白磷酸酶2A(PP2A)第15-27页
   ·PP2A的结构组成第16-20页
   ·PP2A的功能第20-24页
   ·PP2A结构亚基A与肿瘤发生第24-27页
 4. 转录因子调控基因表达的研究进展第27-36页
第二章 蛋白磷酸酶PP2A-Aβ基因启动子的克隆第36-58页
 1 实验材料与仪器试剂第36-37页
   ·实验材料第36页
   ·实验仪器第36-37页
   ·化学试剂第37页
 2 实验方法第37-52页
   ·基因组DNA(genomic DNA)的提取第37-39页
   ·基因启动子的分子克隆第39-42页
   ·删除突变质粒的构建第42-46页
   ·细胞转染用去内毒素高纯质粒的制备第46-48页
   ·脂质体Lipofectamin 2000介导的哺乳动物细胞瞬时转染第48-50页
   ·双荧光素酶活性的测定第50-51页
   ·数据统计学分析第51-52页
 3 实验结果第52-58页
   ·克隆小鼠PP2A-Aβ基因启动子序列第52-53页
   ·PP2A-Aβ基因启动子5'删除突变质粒的构建第53-56页
   ·PP2A-Aβ基因核心启动子区的确定第56-58页
第三章 PP2A-Aβ基因核心启动子区顺式作用元件的确定第58-101页
 1 实验材料与仪器试剂第58-60页
   ·实验材料第58页
   ·实验仪器第58-59页
   ·化学试剂第59-60页
 2 实验方法第60-83页
   ·软件分析启动子上顺式作用元件第60-61页
   ·Western Blot第61-67页
   ·凝胶迁移滞后实验第67-74页
   ·染色质免疫沉降实验第74-83页
   ·数据统计学分析第83页
 3. 实验结果第83-101页
   ·PP2A-Aβ核心启动子B4区段顺式作用元件的软件预测结果第83-84页
   ·Western Blot检测各转录因子在小鼠晶体上皮细αTN4-1中的表达第84-87页
   ·凝胶迁移滞后实验检测各转录因子在体外与小鼠PP2A-Aβ基因启动子序列的相互结合第87-94页
   ·染色质免疫沉降分析检测各转录因子在体内与小鼠PP2A-Aβ基因启动子序列的相互结合第94-101页
第四章 各转录因子对PP2A-Aβ基因启动子的调控作用第101-124页
 1 实验材料与仪器试剂第102-103页
   ·实验材料第102页
   ·实验仪器第102页
   ·化学试剂第102-103页
 2 实验方法第103-111页
   ·定点突变质粒的构建第103-105页
   ·双荧光素酶活性的测定第105页
   ·过表达稳定克隆细胞系的建立第105-107页
   ·总RNA的提取第107-109页
   ·反转录cDNA第一条链的获得第109页
   ·Real-time Quantitative PCR第109-111页
   ·Western Blot第111页
   ·数据统计学分析第111页
 3 实验结果第111-118页
   ·各转录因子结合位点定点突变后的PP2A-Aβ基因核心启动子区荧光素酶活性分析结果第111-113页
   ·共转染各转录因子表达质粒后PP2A-Aβ基因核心启动子区荧光素酶活性分析结果第113-115页
   ·Real-time PCR检测各转录因子对PP2A-Aβ基因RNA水平的调控作用第115-118页
   ·Western Blot检测各转录因子对PP2A-Aβ基因蛋白水平的调控作用第118-124页
第五章 讨论第124-134页
 1 PP2A结构亚基PP2A-Aα和PP2A-Aβ调控存在差异第125-127页
 2 转录因子Ets-1在调节基因表达中的作用第127-128页
 3 Sp1/Sp3调节基因表达时的双重作用第128-130页
 4 视黄素受体RXR与抗癌作用第130-132页
 5 展望第132-134页
参考文献第134-145页
研究生学习期间撰写、发表的主要论文第145-148页
致谢第148-150页

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