摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-10页 |
英文简写表 | 第10-11页 |
第一章 绪论 | 第11-17页 |
·水稻白叶枯病菌致病机制 | 第11页 |
·c-di-GMP 的信号网络 | 第11-15页 |
·c-di-GMP 信号代谢 | 第12-13页 |
·c-di-GMP 信号受体 | 第13-14页 |
·c-di-GMP 信号调控一系列细胞功能 | 第14-15页 |
·水稻白叶枯病菌中 c-di-GMP 信号网络 | 第15-17页 |
·研究目的和意义 | 第15-16页 |
·技术路线 | 第16-17页 |
第二章 c-di-GMP 受体 Filp 互作蛋白的鉴定 | 第17-33页 |
·实验材料 | 第17-18页 |
·菌株和质粒 | 第17页 |
·生化试剂及仪器 | 第17页 |
·培养基和菌株培养条件 | 第17-18页 |
·实验方法 | 第18-26页 |
·诱饵载体和猎物载体以及原核表达载体构建 | 第18-21页 |
·酵母感受态的制作(LiAc 法) | 第21页 |
·诱饵载体和猎物载体转化感受态酵母 | 第21-23页 |
·重组酵母表达质粒自激活和毒性检测 | 第23页 |
·酵母双杂交互作分析 | 第23-24页 |
·蛋白表达和纯化 | 第24页 |
·GST Pull-Down 验证 | 第24-25页 |
·Western Blot 分析 | 第25-26页 |
·结果与分析 | 第26-31页 |
·载体构建 | 第26-28页 |
·诱饵载体毒性和自激活活性检测 | 第28页 |
·酵母双杂交检测 Filp 与 PilZ 结构域蛋白互作 | 第28-29页 |
·体外 c-di-GMP 对蛋白互作的影响 | 第29页 |
·Filp 和 PXO_02715 蛋白表达和纯化 | 第29-30页 |
·GST Pull-Down 验证 | 第30-31页 |
·讨论 | 第31-33页 |
第三章 Filp 蛋白不同结构域与 PilZ 结构域蛋白 PXO_02715 互作分析 | 第33-42页 |
·实验材料 | 第33-34页 |
·菌株和质粒 | 第33页 |
·生化试剂及仪器 | 第33页 |
·培养基和菌株培养条件 | 第33-34页 |
·实验方法 | 第34-37页 |
·猎物载体构建 | 第34-36页 |
·酵母感受态的制作(LiAc 法) | 第36页 |
·猎物载体转化感受态酵母 | 第36页 |
·酵母质粒的提取及 PCR 鉴定 | 第36页 |
·互作分析 | 第36-37页 |
·结果与分析 | 第37-41页 |
·猎物载体构建 | 第37-39页 |
·酵母双杂交载体转化酵母菌株 | 第39-40页 |
·Filp 不同结构域缺失与 PXO_02715 互作 | 第40页 |
·Filp 单独结构域与 PXO_02715 互作 | 第40-41页 |
·讨论 | 第41-42页 |
第四章 c-di-GMP 受体 PXO_02374 互作蛋白的筛选与鉴定 | 第42-53页 |
·实验材料 | 第42页 |
·菌株和质粒 | 第42页 |
·生化试剂及仪器 | 第42页 |
·培养基和培养条件 | 第42页 |
·实验方法 | 第42-45页 |
·引物设计 | 第42-43页 |
·PXO_02374 PCR 扩增 | 第43页 |
·目的片段回收纯化 | 第43页 |
·目的片段 TA 克隆 | 第43页 |
·目的载体构建 | 第43页 |
·重组质粒 pGBK2374 自激活和毒性检测 | 第43页 |
·文库筛选 PXO_02374 互作蛋白 | 第43-45页 |
·结果与分析 | 第45-51页 |
·PXO_02374 诱饵载体构建 | 第45页 |
·诱饵载体自激活和毒性检测 | 第45页 |
·酵母文库筛选 PXO_02374 互作蛋白 | 第45-47页 |
·GST Pull-Down 方法和回交验证互作蛋白 | 第47-51页 |
·讨论 | 第51-53页 |
第五章 全文结论 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-61页 |
附录 1 | 第61-62页 |
附录 2 | 第62-64页 |
附录 3 | 第64-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
作者简历 | 第67页 |