| 缩写词 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-26页 |
| 1. 植物激素乙烯生物合成的研究进展 | 第17-19页 |
| ·SAM synthetase,SAMS | 第18页 |
| ·ACC synthase,ACS | 第18-19页 |
| ·ACC oxidase,ACO | 第19页 |
| 2. 乙烯信号转导的研究进展 | 第19-21页 |
| ·乙烯受体基因 | 第20页 |
| ·铜离子转运基因 | 第20-21页 |
| 3. 兰花分子生物学的研究进展 | 第21-24页 |
| ·在花发育方面 | 第21-22页 |
| ·在花色的基因功能分析和分离方面 | 第22-23页 |
| ·在植物抗病毒基因工程 | 第23-24页 |
| 4. 植物COBRA的研究进展 | 第24-25页 |
| 5. 本研究的目的意义和主要研究内容 | 第25-26页 |
| ·本研究的意义 | 第25页 |
| ·本研究的主要内容 | 第25-26页 |
| 第二章 文心兰乙烯合成途径相关基因的克隆及荧光定量PCR分析 | 第26-39页 |
| 第一节 文心兰ACC合成酶基因ACS3和ACS7基因的克隆 | 第26-33页 |
| 1. 材料与方法 | 第26-28页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| 2. 结果与分析 | 第28-32页 |
| ·文心兰试管苗总RNA的提取及其质量检测 | 第28页 |
| ·文心兰试管苗ACS基因的克隆 | 第28-32页 |
| 3. 讨论 | 第32-33页 |
| ·文心兰ACC合成酶基因ACS克隆的意义 | 第32-33页 |
| ·文心兰ACC合成酶基因未获得完整ORF的原因 | 第33页 |
| 第二节 ACC合成酶基因ACS3、ACS7定量表达分析 | 第33-39页 |
| 1 材料与方法 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂与仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| ·RNA质量分析和cDNA合成时添加RNA体积分析 | 第35页 |
| ·18SRRNA基因和ACS3、ACS7基因的标准曲线分析 | 第35-36页 |
| ·ACS3、ACS7基因在文心兰不同阶段的表达分析 | 第36-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 文心兰乙烯受体基因的克隆及表达分析 | 第39-58页 |
| 第一节 文心兰乙烯受体基因ERS1、ERS2基因的克隆 | 第39-45页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-40页 |
| 2. 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·文心兰乙烯受体基因ERS1、ERS2 ORF的克隆 | 第40-41页 |
| ·文心兰受体基因ERS1、ERS2 3端的克隆 | 第41-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-45页 |
| 第二节 文心兰乙烯受体基因ERS1、ERS2基因生物信息学分析 | 第45-50页 |
| 1 材料与方法 | 第45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·方法 | 第45页 |
| 2 结果分析 | 第45-49页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白质基本理化性质预测与分析 | 第45页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白信号肽及亚细胞定位预测分析 | 第45-46页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白蛋白质跨膜结构预测与分析 | 第46-47页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白磷酸化位点预测与分析 | 第47页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白保守结构域预测与分析 | 第47-48页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第48-49页 |
| ·文心兰乙烯受体基因及其成员蛋白三维结构预测与分析 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| ·乙烯受体蛋白构象与乙烯结合的关系 | 第49页 |
| ·文心兰乙烯受体基因ERS最大可能定位于细胞膜与其功能之间的关系 | 第49-50页 |
| 第三节 文心兰乙烯受体基因定量表达分析 | 第50-52页 |
| 1. 材料与方法 | 第50页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·试剂与仪器 | 第50页 |
| ·方法 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 第四节 文心兰乙烯受体基因ERS亚细胞定位的研究 | 第52-58页 |
| 1. 材料与仪器 | 第52页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| 2. 方法 | 第52-53页 |
| ·添加酶切位点的引物设计 | 第52页 |
| ·植物瞬时表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·瞬时表达载体转化农杆菌 | 第53页 |
| ·洋葱表皮细胞的侵染实验 | 第53页 |
| ·制片,观察 | 第53页 |
| 3. 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·目的基因片段的克隆 | 第53页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第53-55页 |
| ·瞬时表达载体转化农杆菌 | 第55-56页 |
| ·农杆菌侵染洋葱内表皮细胞及观察 | 第56页 |
| 4. 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 文心兰铜离子转运基因COPT基因的克隆及荧光定量表达分析 | 第58-68页 |
| 第一节 文心兰铜离子转运基因CTR/COPT6的克隆 | 第58-61页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-59页 |
| 2. 结果与分析 | 第59-61页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT保守区的克隆 | 第59页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT3端的克隆 | 第59页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT5端的克隆 | 第59页 |
| ·序列拼接 | 第59-60页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT的验证 | 第60-61页 |
| 3. 讨论 | 第61页 |
| ·植物铜转运蛋白家族的功能 | 第61页 |
| ·文心兰铜转运蛋白相关基因克隆的意义 | 第61页 |
| 第二节 文心兰铜离子转运基因COPT6蛋白生物信息学分析 | 第61-66页 |
| 1. 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62页 |
| 2. 结果与分析 | 第62-65页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白质基本理化性质预测与分析 | 第62页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白信号肽及亚细胞定位预测分析 | 第62页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白蛋白质跨膜结构预测与分析 | 第62-63页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白磷酸化位点预测与分析 | 第63页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白保守结构域预测与分析 | 第63-64页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第64页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT蛋白三维结构预测与分析 | 第64-65页 |
| ·文心兰铜离子转运基因COPT基因编码的蛋白质进化分析 | 第65页 |
| 3. 讨论 | 第65-66页 |
| 第三节 文心兰铜离子转运基因COPT定量表达分析 | 第66-68页 |
| 1. 材料与方法 | 第66页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·方法 | 第66页 |
| 2. 结果与分析 | 第66-67页 |
| ·COPT基因的标准曲线分析 | 第66页 |
| ·COPT基因在文心兰不同阶段的表达分析 | 第66-67页 |
| 3. 讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 文心兰COBRA基因的克隆及荧光定量表达分析 | 第68-83页 |
| 第一节 文心兰COBRA基因cDNA和DNA的克隆 | 第68-75页 |
| 1. 材料与方法 | 第68-70页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| 2. 结果与分析 | 第70-75页 |
| ·文心兰COBRA基因保守区核酸序列的获得 | 第70页 |
| ·文心兰COBRA基因3端5端核酸序列的克隆 | 第70-71页 |
| ·文心兰COBRA基因全长的拼接 | 第71-72页 |
| ·COBRA基因ORF的验证 | 第72页 |
| ·COBRA基因DNA的克隆 | 第72-74页 |
| ·文心兰COBRA基因内含子分析 | 第74-75页 |
| 第二节 文心兰COBRA基因的生物信息学分析 | 第75-80页 |
| 1 材料与分析 | 第75页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·方法 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-79页 |
| ·文心兰COBRA蛋白质基本理化性质预测与分析 | 第75-76页 |
| ·文心兰COBRA蛋白信号肽及亚细胞定位预测分析 | 第76页 |
| ·文心兰COBRA蛋白蛋白质跨膜结构预测与分析 | 第76页 |
| ·文心兰COBRA氨基酸序列翻译后的磷酸化修饰预测 | 第76-77页 |
| ·文心兰COBRA蛋白保守结构域预测与分析 | 第77页 |
| ·文心兰COBRA蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第77-78页 |
| ·文心兰COBRA三维结构预测与分析 | 第78页 |
| ·文心兰COBRA基因编码的蛋白质进化分析 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-80页 |
| 第三节 文心兰COBRA基因荧光定量表达分析 | 第80-83页 |
| 1 材料与分析 | 第80页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·方法 | 第80页 |
| 2. 结果与分析 | 第80-82页 |
| ·18 SrRNA基因和COBRA基因标准曲线 | 第80-81页 |
| ·文心兰不同阶段COBRA基因的表达分析 | 第81页 |
| ·文心兰COBRA基因荧光定量的表达分析 | 第81-82页 |
| 3. 讨论 | 第82-83页 |
| 第六章 文心兰ACC氧化酶基因ACO转化烟草与功能鉴定 | 第83-91页 |
| 1. 材料与培养基 | 第83-84页 |
| ·材料 | 第83页 |
| ·试剂与仪器 | 第83页 |
| ·培养基 | 第83页 |
| ·PCR引物 | 第83-84页 |
| 2. 方法 | 第84-85页 |
| ·载体构建 | 第84页 |
| ·转化根癌农杆菌 | 第84-85页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草 | 第85页 |
| ·转基因植株检测 | 第85页 |
| ·乙烯利处理对转基因烟草ACO基因表达的影响 | 第85页 |
| 3. 结果与分析 | 第85-89页 |
| ·植物表达载体的构建及重组质粒的鉴定 | 第85-87页 |
| ·转基因植株检测 | 第87-88页 |
| ·乙烯利处理对烟草ACO基因表达的影响 | 第88-89页 |
| 4. 讨论 | 第89-91页 |
| 第七章 小结 | 第91-94页 |
| 1. 文心兰乙烯代谢相关基因的克隆、生物信息学分析及表达分析 | 第91-92页 |
| 2. 文心兰COBRA基因的克隆及生物信息学分析及荧光定量表达分析 | 第92页 |
| 3. 文心兰ACC氧化基因ACO基因功能的初步鉴定 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 附录1 GenBank上登录的文心兰衰老相关基因cDNA、DNA序列信息(7条) | 第100-114页 |
| 附录2 图版及图版说明 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
