| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| ·GlnR 转录调控因子 | 第10-12页 |
| ·GlnR 因子 | 第10页 |
| ·GlnR 因子对细菌氮源代谢的调控作用 | 第10-12页 |
| ·罗非鱼无乳链球菌病 | 第12-14页 |
| ·无乳链球菌 | 第12页 |
| ·罗非鱼无乳链球菌病 | 第12-13页 |
| ·特点与防治 | 第13-14页 |
| ·实验目的意义及研究内容 | 第14-17页 |
| ·目的意义 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| ·创新点 | 第16-17页 |
| 第二章 无乳链球菌 glnR 基因的克隆 | 第17-26页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌种 | 第17页 |
| ·质粒 | 第17页 |
| ·药品及仪器 | 第17页 |
| ·培养基的配制 | 第17-18页 |
| ·主要试剂及其配制方法 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-22页 |
| ·引物设计与合成 | 第19页 |
| ·PCR 扩增 glnR 基因 | 第19-20页 |
| ·pMD18-glnR 构建 | 第20-22页 |
| ·验证实验及测序 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23页 |
| ·阳性菌的筛选及验证 | 第23-25页 |
| ·结论与讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 重组表达载体及工程菌的构建 | 第26-36页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·质粒 | 第26页 |
| ·药品与仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂及其配制方法 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·JM109-pGEX4T-3 的构建 | 第28页 |
| ·pMD18-glnR 的获取 | 第28页 |
| ·JM109-pGEX4T-glnR 的构建 | 第28-30页 |
| ·重组表达载体的提取及验证 | 第30-31页 |
| ·测序 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·连接反应 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的提取及验证 | 第32-33页 |
| ·测序结果 | 第33页 |
| ·结论与讨论 | 第33-36页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·表达载体 pGEX-4T-3 | 第34-36页 |
| 第四章 重组蛋白的表达及纯化 | 第36-47页 |
| ·实验材料 | 第36-39页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·药品及仪器 | 第36-38页 |
| ·主要试剂及其配制方法 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶配方 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·蛋白表达 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白可溶性验证 | 第41页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·重组蛋白及空载的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·表达条件优化 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白可溶性验证 | 第44-45页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第45页 |
| ·结论与讨论 | 第45-47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 第五章 GlnR 与 glnRA 体外相互作用初步研究 | 第47-66页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·菌种 | 第47-48页 |
| ·质粒 | 第48页 |
| ·药品及仪器 | 第48-49页 |
| ·主要试剂的配制方法 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-55页 |
| ·结合位点预测 | 第50页 |
| ·DNA 结合片段的获得 | 第50-51页 |
| ·非融合蛋白与 DNA 的结合实验 | 第51-53页 |
| ·融合蛋白与 DNA 的结合实验 | 第53页 |
| ·结合常数的测定 | 第53-54页 |
| ·氮素影响验证 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·结合位点预测 | 第55-56页 |
| ·目标 DNA 片段的克隆 | 第56-58页 |
| ·非融合蛋白与 DNA 的结合实验 | 第58页 |
| ·融合蛋白与 DNA 的结合实验 | 第58-59页 |
| ·结合常数测定 | 第59-61页 |
| ·氮素影响验证 | 第61-62页 |
| ·结论与讨论 | 第62-66页 |
| 第六章 结论与展望 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |