| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| ·WRKY 转录因子概况 | 第13-15页 |
| ·转录因子 | 第13页 |
| ·WRKY 转录因子的研究进展 | 第13-14页 |
| ·WRKY 转录因子的结构特点及分类 | 第14页 |
| ·W-box | 第14-15页 |
| ·WRKY 转录因子的生物学功能 | 第15-18页 |
| ·WRKY 转录因子在生物胁迫中的作用 | 第15-17页 |
| ·WRKY 转录因子在非生物胁迫中的作用 | 第17页 |
| ·WRKY 转录因子在植物生长发育中的作用 | 第17-18页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-43页 |
| ·试验材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·生化试剂 | 第20页 |
| ·引物 | 第20-22页 |
| ·试验方法 | 第22-43页 |
| ·棉花的培养与处理 | 第22页 |
| ·cDNA 的合成 | 第22-24页 |
| ·植物总 RNA 的提取 | 第22页 |
| ·总 RNA 中基因组的去除 | 第22-23页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第23页 |
| ·cDNA 的纯化 | 第23-24页 |
| ·cDNA 的 5 末端加尾 | 第24页 |
| ·目的片段的序列测定 | 第24-27页 |
| ·目的片段的回收 | 第24-25页 |
| ·回收产物与载体连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·DNA 序列测序 | 第26-27页 |
| ·cDNA 全长序列的测定 | 第27-30页 |
| ·中间片段的获得 | 第27页 |
| ·5 端序列的获得 | 第27-28页 |
| ·3 端序列的获得 | 第28-29页 |
| ·cDNA 全长的获得 | 第29-30页 |
| ·植物基因组的提取 | 第30-31页 |
| ·CTAB 法提取棉花基因组 DNA | 第30-31页 |
| ·小量法提取基因组 DNA | 第31页 |
| ·DNA 序列的获得 | 第31-32页 |
| ·启动子序列克隆 | 第32-34页 |
| ·模板制备 | 第32页 |
| ·巢式 PCR | 第32-34页 |
| ·启动子序列验证 | 第34页 |
| ·半定量 PCR 检测目的基因表达 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测目的基因拷贝数 | 第35页 |
| ·基因枪法瞬时表达 | 第35-38页 |
| ·瞬时表达载体制备 | 第35-36页 |
| ·大量法提取质粒 DNA | 第36-37页 |
| ·微弹制备 | 第37页 |
| ·基因枪转化 | 第37-38页 |
| ·真核表达载体的构建及转基因植株的获得及鉴定 | 第38-40页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第38页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| ·农杆菌介导的本生烟转化 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第40页 |
| ·转基因植株抗病功能分析 | 第40-41页 |
| ·接种病毒 | 第40-41页 |
| ·接种真菌 | 第41页 |
| ·转基因植株抗病性数据统计 | 第41页 |
| ·半定量 PCR 检测本生烟目的基因表达 | 第41页 |
| ·网络资源及数据库 | 第41-42页 |
| ·生物学软件 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-59页 |
| ·棉花 GhWRKY11 基因的克隆及其序列分析 | 第43-48页 |
| ·棉花 GhWRKY11 中间片段的分离 | 第43页 |
| ·棉花 GhWRKY113 端片段的分离 | 第43页 |
| ·棉花 GhWRKY115 端片段的分离 | 第43-44页 |
| ·棉花 GhWRKY11 cDNA 序列的分离 | 第44-45页 |
| ·棉花 GhWRKY11 核苷酸序列分析 | 第45页 |
| ·棉花 GhWRKY11 氨基酸序列分析 | 第45-46页 |
| ·棉花 GhWRKY11 进化关系分析 | 第46-48页 |
| ·GhWRKY11 DNA 序列的克隆及其拷贝数分析 | 第48-49页 |
| ·GhWRKY11 DNA 序列的分离 | 第48页 |
| ·GhWRKY11 在棉花基因组中拷贝数分析 | 第48-49页 |
| ·GhWRKY11 启动子序列的分离及序列分析 | 第49-50页 |
| ·GhWRKY11 启动子的分离 | 第49页 |
| ·GhWRKY11 启动子序列分析 | 第49-50页 |
| ·GhWRKY11 亚细胞定位分析 | 第50-51页 |
| ·GhWRKY11 mRNA 水平表达模式分析 | 第51-54页 |
| ·非生物胁迫对 GhWRKY11 mRNA 水平变化的影响 | 第51-52页 |
| ·生物胁迫条件下 GhWRKY11 mRNA 的变化 | 第52页 |
| ·信号分子对 GhWRKY11 mRNA 水平变化的影响 | 第52-54页 |
| ·GhWRKY11 在本生烟中超表达及其功能分析 | 第54-59页 |
| ·GhWRKY11 正义表达载体的构建 | 第54页 |
| ·转基因植株的获得及鉴定 | 第54-55页 |
| ·过表达 GhWRKY11 本生烟抗病性分析 | 第55-59页 |
| ·过表达 GhWRKY11 本生烟抗病毒分析 | 第55页 |
| ·GhWRKY11 的过表达降低了病毒对转基因植株的氧化胁迫 | 第55-56页 |
| ·GhWRKY11 过表达植株通过 SA 介导的信号途径参与胁迫反应 | 第56页 |
| ·GhWRKY11 过表达植株广谱抗病性分析 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| ·GhWRKY11 转录因子特性分析 | 第59页 |
| ·GhWRKY11 受多种外界环境及信号分子诱导 | 第59-60页 |
| ·GhWRKY11 超表达提高了转基因植株对病原菌的抗性 | 第60-61页 |
| ·GhWRKY11 抗病信号途径探究 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第70页 |
