| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| ·概述 | 第9页 |
| ·VEGF 家族蛋白的研究概述 | 第9-11页 |
| ·VEGF 家族 | 第9-10页 |
| ·VEGF 受体及其生物学功能 | 第10-11页 |
| ·VEGF165 研究概述 | 第11-14页 |
| ·VEGF165 作用机制 | 第11-12页 |
| ·VEGF165 表达方面的研究 | 第12-13页 |
| ·VEGF165 生物学功能研究进展 | 第13页 |
| ·VEGF165 稳定性研究 | 第13-14页 |
| ·VEGF165 应用前景 | 第14页 |
| ·VEGF165b 研究概述 | 第14-17页 |
| ·VEGF165b 作用机制 | 第15-16页 |
| ·VEGF165b 表达方面研究 | 第16页 |
| ·VEGF165b 生物学功能研究进展 | 第16页 |
| ·定点突变 | 第16-17页 |
| ·VEGF165b 应用前景 | 第17页 |
| ·立题意义 | 第17页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第17-19页 |
| 第二章 VEGF165、VEGF165b 及类似物的构建与表达 | 第19-34页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-24页 |
| ·质粒构建 | 第20-24页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第24页 |
| ·重组菌诱导表达 | 第24页 |
| ·实验结果与讨论 | 第24-32页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-VEGF165 构建 | 第24-25页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-HSA-VEGF165 构建 | 第25-27页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-VEGF165b 的构建 | 第27页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-VEGF165bE44R 的构建 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-VEGF165bE67R 的构建 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-VEGF165bEE7273RR 的构建 | 第29-30页 |
| ·pPIC9K-VEGF165 在毕赤酵母 GS115 中的表达 | 第30-31页 |
| ·pPIC9K-HSA-VEGF165 在毕赤酵母 GS115 中的表达 | 第31页 |
| ·VEGF165b 及其类似物在毕赤酵母中的表达 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-34页 |
| 第三章 VEGF165、VEGF165b 及类似物的分离纯化与鉴定 | 第34-41页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·单体 VEGF165 蛋白纯化步骤 | 第34页 |
| ·融合蛋白 HSA-VEGF165 纯化步骤 | 第34页 |
| ·VEGF165b 及其类似物的蛋白纯化步骤 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白 Western Blot 鉴定方法 | 第35页 |
| ·实验结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·VEGF165 蛋白纯化结果 | 第35页 |
| ·融合蛋白 HSA-VEGF165 纯化 | 第35-36页 |
| ·VEGF165b 及其类似物的蛋白纯化 | 第36-38页 |
| ·重组蛋白 Western Blot 鉴定结果 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 VEGF165、VEGF165b 及类似物的活性评价 | 第41-53页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·细胞株 | 第41页 |
| ·动物 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·细胞培养 | 第42页 |
| ·MTT 法测定 VEGF165 和 HSA-VEGF165 蛋白对 HUVEC 细胞增殖实验 | 第42页 |
| ·测定体内 VEGF165 和 HSA-VEGF165 血浆药物浓度-时间曲线实验 | 第42-43页 |
| ·VEGF165b 及其类似物与细胞 EAhy926 结合活性实验 | 第43页 |
| ·VEGF165b 及其类似物与 VEGF165 竞争结合受体 VEGFR2 实验 | 第43-44页 |
| ·MTT 法测定 VEGF165bE67R 抑制 VEGF165 介导的 HUVEC 细胞增殖实验 | 第44页 |
| ·VEGF165bE67R 抑制 A549 细胞迁移实验 | 第44页 |
| ·实验结果与讨论 | 第44-52页 |
| ·VEGF165 和 HSA-VEGF165 蛋白体外活性比较 | 第44-46页 |
| ·VEGF165 和 HSA-VEGF165 体内活性比较 | 第46-47页 |
| ·VEGF165b 及其类似物与细胞 EAhy926 结合活性情况 | 第47-48页 |
| ·VEGF165b 及其类似物与 VEGF165 竞争结合受体 VEGFR2 情况 | 第48-50页 |
| ·VEGF165bE67R 抑制 VEGF165 介导的 HUVEC 细胞增殖实验 | 第50页 |
| ·VEGF165bE67R 抑制 A549 细胞迁移实验 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 主要结论与展望 | 第53-55页 |
| 主要结论 | 第53-54页 |
| 存在问题及展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
