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受体来源大鼠ADSCs分化的类肝细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

中英文对照缩略语总览第1-7页
目录第7-14页
前言第14-17页
中文摘要第17-23页
Abstract第23-31页
第一部分 大鼠肝移植模型的建立第31-60页
 引言第31-32页
 1. 材料与方法第32-37页
   ·器械与材料第32页
   ·手术方法第32-37页
     ·术前准备第32页
     ·麻醉第32-33页
     ·供体手术第33-34页
     ·修肝第34页
     ·受体手术第34-37页
     ·术后处理第37页
     ·大鼠高急性排斥反应肝移植模型的建立第37页
   ·统计方法第37页
 2. 结果第37-41页
     ·训练阶段训练曲线(无肝期时间)第37-38页
     ·大鼠高排斥反应肝移植模型的建立第38-41页
     ·DA→Lewis及SD→SD手术操作时间的记录第38-39页
     ·DA→Lewis及SD→SD术后肝功能的比较第39页
       ·DA→Lewis及SD→SD术后生存期的比较第39-40页
     ·DA→Lewis及SD→SD术后病理表现的比较第40-41页
 3. 讨论第41-47页
   ·手术方式的选择及动物的选择第41-42页
   ·麻醉第42-43页
   ·供体的手术第43-44页
   ·供肝的修整第44-45页
   ·受体手术第45-47页
     ·受体肝脏的分离第45页
     ·对无肝期的控制及精确的血管吻合第45-47页
     ·最大限度减少无肝期造成的血流动力学紊乱第47页
 4. 结论第47-48页
 5. 参考文献第48-60页
第二部分 大鼠脂肪源性干细胞诱导形成的类肝细胞的免疫调节作用的体外实验的研究第60-103页
 引言第60-61页
 1. 材料与方法第61-72页
   ·材料与仪器第61-65页
     ·实验动物第61页
     ·主要试剂第61-62页
     ·主要设备及仪器第62-63页
     ·主要试剂的配制方法第63-65页
   ·实验方法第65-71页
     ·脂肪源性干细胞的分离、克隆筛选纯化培养第65-66页
     ·脂肪源性干细胞的传代第66-67页
     ·脂肪源性干细胞的冻存与复苏第67-68页
     ·脂肪源性干细胞流式细胞仪检测细胞表面标志第68页
     ·脂肪源性干细胞向类肝细胞诱导的实验第68页
     ·诱导过程中用倒显微镜观察细胞形态变化第68页
     ·诱导过程中RT-PCR检测肝细胞特征性蛋白的表达第68-69页
     ·诱导过程中检测上清液中尿素及血氨的浓度变化第69页
     ·类肝细胞首次传代后行免疫荧光组织化学检测细胞白蛋白的表达第69页
     ·Leiws大鼠脂肪源性干细胞及iPS的免疫学特性的检查第69-71页
     ·MLR体系中IL-2及IL-10测定第71页
   ·统计学处理第71-72页
 2. 结果第72-87页
   ·大鼠脂肪源性干源性干细胞分离、纯化及鉴定第72-77页
     ·细胞数目、形态观察第72-74页
     ·纯化处理后的ADSCs(实验组)与未纯化处理的ADSCs(对照组)多代传代后的生长曲线及倍增时间的比较第74-75页
     ·脂肪源性干细胞的抗原表达第75-77页
     ·ADSCs体外诱导的鉴定第77-82页
     ·形态学检查第77-79页
     ·用RT-PCR法检测第79-80页
     ·肝脏的代谢试验第80-81页
     ·ALB免疫荧光染色第81-82页
   ·ADSCs及类肝细胞的免疫调节作用第82-87页
       ·不同浓度脂肪源性干细胞对混合淋巴细胞培养体系的作用第82页
       ·不同浓度类肝细胞对混合淋巴细胞培养体系的作用第82-83页
     ·不同浓度脂肪源性干细胞及类肝细胞对混合淋巴细胞培养体系的作用的比较第83-84页
     ·混合淋巴培养体系上清液中IL-2及IL-10水平的测定第84-87页
 3. 讨论第87-95页
   ·大鼠脂肪源性干细胞的分离与纯化第88-90页
   ·大鼠脂肪源性干细胞向肝细胞诱导分化及其形成的类肝细胞的鉴定第90-93页
   ·大鼠脂肪源性干细胞诱导形成的类肝细胞的免疫调节作用及机理的探讨第93-95页
 4 结论第95-96页
 5. 参考文献第96-103页
第三部分 受体来源的大鼠脂肪源性干细胞诱导形成的类肝细胞对大鼠肝移植免疫排斥的影响第103-166页
 引言第103-104页
 1. 材料与方法第104-118页
   ·材料第104-109页
     ·实验动物第104-105页
     ·实验仪器及器械第105-106页
     ·实验材料与药品手术材料第106-107页
     ·实验试剂的配制第107-109页
   ·实验方法第109-117页
     ·类肝细胞的准备第109页
     ·Leiws诱导后大鼠脂肪源性间充质干细胞的类肝细胞的体外示踪标记第109页
     ·由Leiws大鼠ADSCs诱导的iPS的体外示踪标记的荧光免疫鉴定第109-110页
     ·类肝细胞的分装第110-111页
     ·大鼠肝移植模型的建立及实验分组第111页
     ·实验取材第111-112页
     ·一般观察、监测指标第112页
     ·生存期分析第112页
     ·血清肝功能的检测第112页
     ·血清细胞因子检测第112-113页
     ·病理切片的制作第113-114页
     ·冰冻切片的制作第114页
     ·示踪剂Brdu免疫荧光染色第114页
     ·急性排斥反应指数的判断第114-116页
     ·脾脏T淋巴细胞转化实验第116-117页
     ·大鼠外周血T淋巴细胞表面标志CD4、CD8的表达第117页
     ·统计方法第117-118页
 2. 结果第118-142页
   ·大鼠肝移植急性排斥模型的建立第118-121页
   ·血清肝功能的检测第121-125页
     ·术后血清ALT水平的检测第121-122页
     ·术后血清AST的检测第122-123页
     ·术后血清TBIL的检测第123-125页
   ·血清细胞因子检测的结果第125-129页
     ·血清IL-2水平的检测第125-126页
     ·血清INF-γ水平的检测第126-128页
     ·血清IL-10水平的检测第128页
     ·血清IL-4水平的检测第128-129页
   ·移植肝的病理组织学检查及各实验组排斥指数的比较第129-136页
     ·各实验组的病理学观察第129-134页
       ·各组的排斥指数的比较第134-136页
   ·ADSCs及类肝细胞免疫荧光染色示踪第136-140页
     ·ADSCs及类肝细胞的体外标记结果第136-138页
     ·ADSCs及类肝细胞的肝内定位及与术后时间的关系第138-140页
   ·ADSCs及类肝细胞移植术后大鼠免疫免疫状态的检测第140-142页
     ·混合淋巴试验第140-141页
     ·术后T淋巴细胞亚群变化检测的结果第141-142页
 3. 讨论第142-157页
   ·实验动物的选择第144-145页
   ·实验设计的目标第145-146页
   ·ADSCs及类肝细胞向移植肝的归巢及动态的变化第146-148页
   ·ADSCs及类肝细胞对高排斥模型实验各组肝功能的影响第148-150页
   ·ADSCs及类肝细胞对高排斥模型实验各组免疫系统的影响第150-154页
     ·对术后T淋巴细胞亚群的流式细胞仪的检测第154-155页
   ·术后输入干细胞对肝移植术后急性排斥反形态学的影响第155-157页
 4. 结论第157-158页
 5. 参考文献第158-166页
综述 脂肪源性干细胞在肝移植中运用的现状与展望第166-188页
 一、肝移植的国内外的临床运用现状第166-167页
 二、肝移植存在的问题第167-168页
 三、同种异体肝移植的免疫排斥的机理第168-170页
 四、同种异体肝移植免疫耐受形成的原理第170-174页
 五、肝移植免疫耐受第174-175页
 六、间质干细胞的免疫调节功能第175-177页
 七、ADSCS的发现、分化及免疫特性第177-180页
 参考文献第180-188页
攻读学位期间发表的文章第188-189页
致谢第189-190页

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