| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-30页 |
| ·植物ROS的产生及清除机制 | 第16-18页 |
| ·植物ROS的产生 | 第16-17页 |
| ·植物ROS的清除 | 第17-18页 |
| ·植物抗坏血酸的功能及合成机制 | 第18-26页 |
| ·植物抗坏血酸的功能 | 第18-20页 |
| ·抗坏血酸在光破坏防御中的作用 | 第19页 |
| ·抗坏血酸在细胞壁代谢和细胞生长中的作用 | 第19-20页 |
| ·抗坏血酸在信号传导中的作用 | 第20页 |
| ·植物抗坏血酸的合成途径 | 第20-23页 |
| ·植物抗坏血酸的代谢 | 第23页 |
| ·Sminroff-Wheeler途径关键酶的研究进展 | 第23-26页 |
| ·低温胁迫对植物的影响 | 第26-28页 |
| ·低温可以引起植物光合作用的光抑制 | 第26-27页 |
| ·低温条件下PSⅡ的光抑制 | 第27页 |
| ·低温条件下PSⅠ的光抑制 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-50页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·材料处理 | 第30页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·酶及生化试剂 | 第30-31页 |
| ·PCR引物 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-50页 |
| ·总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第32-33页 |
| ·番茄GDP-L-半乳糖磷酸酶基因的克隆 | 第33页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第33-40页 |
| ·正、反义表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第35页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第35-36页 |
| ·质粒DNA的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·回收 | 第36页 |
| ·DNA序列测定 | 第36页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备与转化 | 第36-37页 |
| ·农杆菌介导转化拟南芥、番茄及烟草 | 第37-40页 |
| ·农杆菌介导转化拟南芥 | 第37-38页 |
| ·农杆菌介导转化番茄 | 第38-39页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第40-42页 |
| ·CTAB微量法提取基因组DNA | 第40页 |
| ·转基因植株的PCR筛选 | 第40-41页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第41-42页 |
| ·转基因番茄的qRT-PCR分析 | 第41页 |
| ·L-半乳糖途径相关基因的qRT-PCR分析 | 第41-42页 |
| ·GDP-L-半乳糖磷酸酶的原核表达及Western杂交 | 第42-46页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第42页 |
| ·E.coli BL21原核表达的诱导 | 第42页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-43页 |
| ·抗体的制备 | 第43-44页 |
| ·抗血清效价的测定(试管微量沉淀法) | 第44页 |
| ·Western杂交 | 第44-46页 |
| ·GDP-L-半乳糖磷酸酶的定位 | 第46-47页 |
| ·pBI121-S1GGP-GFP表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·pBI121-S1GGP-GFP重组蛋白亚细胞定位 | 第47页 |
| ·生理指标的测定 | 第47-49页 |
| ·AsA含量的测定 | 第47页 |
| ·光合气体交换参数的测定 | 第47页 |
| ·叶绿素荧光参数测定 | 第47-48页 |
| ·P700的820nm光吸收 | 第48页 |
| ·电解质外渗量、H_2O_2和O_2~-含量测定 | 第48页 |
| ·膜脂过氧化程度分析 | 第48页 |
| ·抗氧化酶活性测定 | 第48-49页 |
| ·H_2O_2与O_2~-染色分析 | 第49页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第49页 |
| ·类囊体膜的制备 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-81页 |
| ·SlGGP基因的分离及其特征 | 第50-59页 |
| ·SlGGP基因全长的克隆 | 第50页 |
| ·SlGGP基因的序列分析 | 第50-53页 |
| ·S1GGP-GFP融合蛋白的定位 | 第53-54页 |
| ·SlGGP在番茄中的表达分析 | 第54-56页 |
| ·SlGGP基因在大肠杆菌中的表达 | 第56-58页 |
| ·正、反义表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·SlGGP的表达延迟了拟南芥vtc2-1的开花时间 | 第59-60页 |
| ·SlGGP基因在番茄中的遗传转化 | 第60-69页 |
| ·转反义SlGGP基因番茄植株的鉴定 | 第60-62页 |
| ·抑制SlGGP基因的表达影响L-半乳糖合成途径中其它相关酶基因的表达 | 第62-63页 |
| ·抑制SlGGP基因的表达影响番茄叶片的抗坏血酸含量 | 第63页 |
| ·抑制SlGGP基因的表达降低番茄抗低温胁迫的能力 | 第63-69页 |
| ·SlGGP基因在烟草中的遗传转化 | 第69-81页 |
| ·正义表达载体的构建 | 第69页 |
| ·转SlGGP基因烟草的获得及表达分析 | 第69-71页 |
| ·SlGGP过表达提高烟草抗低温胁迫能力 | 第71-75页 |
| ·SlGGP过表达提高烟草抗氧化胁迫的能力 | 第75-81页 |
| 4 讨论 | 第81-86页 |
| 5 结论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第100页 |
