| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·细胞外基质 | 第10-14页 |
| ·细胞外基质的定义 | 第10页 |
| ·人工细胞外基质的分类 | 第10-13页 |
| ·天然生物大分子构建人工 ECM | 第10-11页 |
| ·合成高分子化合物构建人工 ECM | 第11-12页 |
| ·基因工程蛋白构建人工 ECM | 第12页 |
| ·复合材料构建人工 ECM | 第12-13页 |
| ·细胞外基质金属蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·细胞外基质蛋白酶的分类及功能 | 第13页 |
| ·细胞外基质蛋白酶的应用 | 第13-14页 |
| ·人工细胞外基质的应用 | 第14-15页 |
| ·模拟天然 ECM 的纤维性和弹性 | 第14页 |
| ·模拟天然 ECM 的细胞粘附特性 | 第14页 |
| ·模拟天然 ECM 的信号分子特性 | 第14-15页 |
| ·模拟天然 ECM 的蛋白酶敏感特性 | 第15页 |
| ·人工细胞外基质应用中存在的问题 | 第15-20页 |
| ·血管结构 | 第16页 |
| ·参与血管新生过程的重要活性因子 | 第16-17页 |
| ·血管内皮细胞生长因子（VEGF） | 第17页 |
| ·表皮细胞生长因子（EGF） | 第17页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） | 第17页 |
| ·当前解决血管新生问题的主要方案 | 第17-20页 |
| ·以细胞为基础诱导血管新生 | 第18-20页 |
| ·以支架为基础诱导血管新生 | 第20页 |
| ·研究工作的提出 | 第20-22页 |
| 第二章 生长因子型细胞外基质 VEGF-Fc 的制备 | 第22-36页 |
| ·引言 | 第22-23页 |
| ·实验部分 | 第23-31页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要试剂的制备 | 第24页 |
| ·pcDNA3.1-VEGF-Fc 真核表达载体的构建 | 第24-28页 |
| ·VEGF-165 基因序列的克隆和序列分析 | 第24-26页 |
| ·PCR 产物与 pcDNA/3.1-Fc 载体双酶切 | 第26页 |
| ·载体与目的片段的连接反应 | 第26-27页 |
| ·CaCl2转化感受态细胞 DH5α的制备 | 第27页 |
| ·质粒转化及阳性克隆子的筛选 | 第27页 |
| ·质粒 pcDNA/3.1-VEGF-Fc 大量提取 | 第27-28页 |
| ·293F 细胞瞬时转染 | 第28页 |
| ·融合蛋白纯化 | 第28-29页 |
| ·Western blotting 分析 | 第29页 |
| ·VEGF-Fc 修饰聚苯乙烯平板 | 第29-30页 |
| ·细胞培养和传代 | 第30-31页 |
| ·最适 VEGF-Fc 浓度用于制备细胞外基质 | 第31页 |
| ·实验数据统计与分析 | 第31页 |
| ·实验结果与讨论 | 第31-34页 |
| ·pcDNA3.1-VEGF-Fc 质粒构建 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·聚苯乙烯平板表面融合蛋白 VEGF-Fc 的固定 | 第33-34页 |
| ·最适融合蛋白 VEGF-Fc 加入量的确定 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 生长因子型细胞外基质 VEGF-Fc 对 HUVEC 生存的影响 | 第36-52页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·实验部分 | 第37-41页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第37-38页 |
| ·不同细胞外基质的制备 | 第38页 |
| ·细胞培养 | 第38-39页 |
| ·静态接触角的测定 | 第39页 |
| ·细胞粘附与增殖实验 | 第39页 |
| ·免疫荧光染色 | 第39-40页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 | 第40-41页 |
| ·总 mRNA 提取 | 第40-41页 |
| ·反转录获得 cDNA | 第41页 |
| ·统计学分析 | 第41页 |
| ·实验结果与讨论 | 第41-51页 |
| ·不同人工细胞外基质的亲水性 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质的生长因子活性检测 | 第42-44页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质表面 HUVEC 的粘附 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质表面 HUVEC 的增殖 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质表面 HUVEC 的骨架形态 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质表面血管内皮细胞 vWF 的表达 | 第48页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质表面血管内皮细胞 VE-Cad 的表达 | 第48-50页 |
| ·融合蛋白 VEGF-Fc 基质对 HUVEC 基因表达的影响 | 第50-51页 |
| ·本章结论 | 第51-52页 |
| 第四章 蛋白酶敏感型细胞外基质 VEGF-SMP-Fc 的构建及 VEGF 控制释放 | 第52-64页 |
| ·引言 | 第52-53页 |
| ·实验部分 | 第53-58页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第53-54页 |
| ·主要试剂的制备 | 第54-55页 |
| ·pcDNA3.1-VEGF-SMP-Fc 真核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·分别克隆 VEGF-165 和 MMP-2 底物的基因序列析 | 第55页 |
| ·VEGF-165 的 PCR 产物、含 SMP 序列质粒与 pcDNA/3.1-Fc 载体双酶切 | 第55页 |
| ·载体与目的片段的连接反应 | 第55-56页 |
| ·质粒转化、阳性克隆子筛选和质粒 pcDNA/3.1-VEGF-SMP-Fc 提取 | 第56页 |
| ·融合蛋白 VEGF-SMP-Fc 表达、纯化及 Western blotting 分析 | 第56页 |
| ·MMP-2 酶原活化 | 第56页 |
| ·MMP-2 对 VEGF-165 的影响 | 第56-57页 |
| ·释放缓冲体系的选择 | 第57页 |
| ·MMP-2 加入量对融合蛋白 VEGF-SMP-Fc 中 VEGF 释放的影响 | 第57页 |
| ·MMP-2 酶对融合蛋白 VEGF-SMP-Fc 半衰期影响 | 第57页 |
| ·MMP-2 酶响应性 VEGF 释放 | 第57-58页 |
| ·统计学分析 | 第58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-63页 |
| ·融合蛋白 VEGF-SMP-Fc 质粒制备及蛋白表达 | 第58-59页 |
| ·MMP-2 对 VEGF-165 的影响 | 第59-60页 |
| ·最适释放缓冲体系的选择 | 第60-61页 |
| ·MMP-2 加入量对融合蛋白 VEGF-SMP-Fc 中 VEGF 释放的影响 | 第61页 |
| ·MMP-2 对 VEGF 半衰期影响 | 第61-62页 |
| ·MMP-2 敏感型融合蛋白 VEGF-SMP-Fc 中 VEGF 的控制释放 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 发表论文和参加科研情况的说明 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
