| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1 环糊精的介绍 | 第13-16页 |
| ·环糊精的结构 | 第13-14页 |
| ·环糊精的性质 | 第14页 |
| ·环糊精的应用 | 第14-15页 |
| ·环糊精的生产 | 第15-16页 |
| 2 酶的体外进化及定点突变技术 | 第16-21页 |
| ·酶的体外进化理论依据 | 第16-17页 |
| ·定点突变 | 第17-21页 |
| 3 环糊精葡萄糖基转移酶研究进展 | 第21-28页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶简介 | 第21-22页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶的来源 | 第22-23页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶的结构特征 | 第23-24页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶酶学性质 | 第24-26页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶的发酵生产方式 | 第26-27页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶体外定点突变研究进展 | 第27-28页 |
| 4 本论文主要研究内容 | 第28-29页 |
| 第二章 β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase)基因的定点突变 | 第29-45页 |
| 1 引言 | 第29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-36页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·酶与试剂 | 第30页 |
| ·质粒与菌株 | 第30-31页 |
| ·培养基及抗生素 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-39页 |
| ·突变基因的获得 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·突变体测序结果分析 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase)突变基因的表达及其酶学性质分析 | 第45-63页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-53页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·酶与试剂 | 第45页 |
| ·质粒与菌株 | 第45-46页 |
| ·培养基及抗生素 | 第46页 |
| ·溶液配制 | 第46-48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| 3 结果与讨论 | 第53-61页 |
| ·β-CGTase重组突变表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·突变基因测序分析结果 | 第54-56页 |
| ·突变蛋白的诱导表达及Western blotting鉴定 | 第56-57页 |
| ·突变酶的酶活分析 | 第57页 |
| ·突变酶的性质 | 第57-60页 |
| ·β-环糊精葡萄糖基转移酶及突变酶的动力学参数 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61页 |
| 5 小结 | 第61-63页 |
| 第四章 产β-CGTase重组大肠杆菌发酵工艺优化 | 第63-105页 |
| 1 前言 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-66页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·菌株 | 第63页 |
| ·培养基及抗生素 | 第63-64页 |
| ·溶液配制 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-103页 |
| ·不同碳源对β-CGTase活力的影响 | 第66页 |
| ·不同氮源对β-CGTase活力的影响 | 第66-67页 |
| ·不同金属离子对β-CGTase活力的影响 | 第67-68页 |
| ·不同磷酸盐对β-CGTase活力的影响 | 第68页 |
| ·初始pH值的确定 | 第68-69页 |
| ·最适发酵温度的确定 | 第69-70页 |
| ·最适接种量的确定 | 第70页 |
| ·最适摇床转速的确定 | 第70-71页 |
| ·响应面法优化突变菌株发酵工艺参数 | 第71-103页 |
| 4 讨论 | 第103页 |
| 5 小结 | 第103-105页 |
| 第五章 5.0L自动发酵罐扩大培养的初步研究 | 第105-115页 |
| 1 前言 | 第105页 |
| 2 材料与方法 | 第105-107页 |
| ·材料 | 第105-106页 |
| ·方法 | 第106-107页 |
| 3 结果与分析 | 第107-113页 |
| ·溶氧对β-CGTase发酵过程的影响 | 第108-110页 |
| ·温度对β-CGTase发酵过程的影响 | 第110-112页 |
| ·HPLC-MS检测结果 | 第112-113页 |
| 4 讨论 | 第113页 |
| 5 小结 | 第113-115页 |
| 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-125页 |
| 附录 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 作者简介 | 第128-129页 |
| 附件 | 第129页 |
