| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 1.Anticalin概况 | 第14-15页 |
| 2 核糖体展示技术的原理 | 第15-16页 |
| 3 RD Anticalin模拟抗体库制备技术的基本原理及过程 | 第16页 |
| 4.RD Anticalin模拟抗体库的优点 | 第16-18页 |
| ·Anticalin突变库的优点 | 第16-17页 |
| ·核糖体展示的优点 | 第17-18页 |
| 5 国内外研究现状 | 第18-19页 |
| ·Anticalin制备技术的研究进展 | 第18页 |
| ·RD技术适合从突变库中筛选特异模拟抗体 | 第18-19页 |
| 6.氨苄青霉素的污染现状、危害及快速检测的现状 | 第19-22页 |
| ·氨苄青霉素性质 | 第19-20页 |
| ·氨苄青霉素的应用 | 第20页 |
| ·Amp残留的影响及危害 | 第20-21页 |
| ·残留分析方法 | 第21-22页 |
| ·微生物检测法 | 第21页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第21页 |
| ·色/质联用测定法 | 第21-22页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第22页 |
| ·薄层色谱法(TLC) | 第22页 |
| ·免疫分析法 | 第22页 |
| 7.研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 8.技术路线图 | 第24-25页 |
| 第二章 BBP的合成与高效表达 | 第25-43页 |
| 1.前言 | 第25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-35页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·质粒与菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·BBP序列的优化设计与引物合成 | 第26-27页 |
| ·BBP基因的PCR合成 | 第27-30页 |
| ·BBP基因的分段物合成 | 第28-29页 |
| ·BBP基因的1-8引物合成 | 第29页 |
| ·BBP基因全长的合成 | 第29-30页 |
| ·DH5α感受态细胞 | 第30页 |
| ·BBP克隆重组载体的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-BBP的构建与诱导表达 | 第31-32页 |
| ·pET-32-BBP表达质粒的构建 | 第31页 |
| ·pET-32a-BBP的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·重组表达质粒pBV-220-BBP的构建与诱导表达 | 第32-33页 |
| ·表达质粒pBV-220-BBP的构建 | 第32-33页 |
| ·pBV-220-BBP的诱导表达 | 第33页 |
| ·BBP的变复性 | 第33-34页 |
| ·BBP的纯化 | 第34页 |
| ·Ni柱再生: | 第34页 |
| ·Ni柱纯化 | 第34页 |
| ·BBP的Western blot检测 | 第34-35页 |
| 3.结果与分析 | 第35-40页 |
| ·合成序列的PCR结果 | 第35页 |
| ·克隆载体pEasy-BBP的鉴定 | 第35-36页 |
| ·BBP合成序列的测序结果 | 第36-37页 |
| ·表达载体pET-32a-BBP的鉴定 | 第37-38页 |
| ·pET-32a-BBP的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·pET-32a-BBP的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·表达载体pBV-220-BBP的鉴定 | 第38-39页 |
| ·pBV-220-BBP的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·pBV-220-BBP的诱导表达 | 第39页 |
| ·纯化结果的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| ·纯化BBP的Western印迹分析 | 第40页 |
| 4.讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 Acticalin库的构建与质量鉴定 | 第43-63页 |
| 1.前言 | 第43页 |
| 2.材料与方法 | 第43-56页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·质粒与菌株 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-56页 |
| ·Acticalin模拟抗体库构建的引物合成 | 第44-45页 |
| ·Acticalin模拟抗体库的构建 | 第45-47页 |
| ·核糖体展示Acticalin模拟抗体库的构建 | 第47-52页 |
| ·TAC启动子、SD序列及BBP前237bp片段的扩增 | 第47-49页 |
| ·BBP的219-402bp的扩增 | 第49-50页 |
| ·G4S、Protein D与BBP的384-522bp扩增 | 第50-52页 |
| ·以TAC为启动子的库全长合成 | 第52页 |
| ·以T7为启动子的核糖体库的构建 | 第52-54页 |
| ·T7启动子的扩增 | 第52-53页 |
| ·除启动子外全长的合成 | 第53页 |
| ·T7库全长的合成 | 第53-54页 |
| ·Acticalin文库的完整性与多样性鉴定 | 第54页 |
| ·Acticalin库容量的鉴定 | 第54页 |
| ·RD Acticalin模拟抗体库的可扩增性鉴定 | 第54-55页 |
| ·Tac启动子抗体库的可扩增性鉴定 | 第54-55页 |
| ·T7启动子抗体库的可扩增性鉴定 | 第55页 |
| ·ScFv文库的转录活性与反转录活性鉴定 | 第55-56页 |
| ·转录活性鉴定 | 第55-56页 |
| ·反转录活性鉴定 | 第56页 |
| 3.结果与分析 | 第56-60页 |
| ·Aeticalin模拟抗体库的分段合成 | 第56-57页 |
| ·库的合成 | 第57页 |
| ·T7库与Tac库的阳性鉴定 | 第57-58页 |
| ·库的测序鉴定 | 第58-59页 |
| ·ScFv抗体库容量 | 第59-60页 |
| ·转录活性鉴定 | 第60页 |
| ·反转录活性鉴定 | 第60页 |
| 4.讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 氨苄青霉素全抗原的合成与模拟抗体的筛选 | 第63-76页 |
| 1.前言 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-70页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·质粒与菌株 | 第63-64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-70页 |
| ·包被原(Amp-PLL)的合成 | 第64-65页 |
| ·包被原蛋白定量鉴定 | 第65页 |
| ·ScFv文库的体外转录与翻译 | 第65-66页 |
| ·ScFv文库的体外筛选 | 第66页 |
| ·mRNA的纯化 | 第66-67页 |
| ·纯化前准备工作 | 第66页 |
| ·纯化步骤 | 第66-67页 |
| ·DNA模板的去除 | 第67页 |
| ·mRNA反转录 | 第67页 |
| ·RT-PCR重新构建RD模板 | 第67-69页 |
| ·Acticalin库的扩增 | 第67-68页 |
| ·ProteinD与3'—Loop连接Acticalin库 | 第68页 |
| ·T7启动子连接Acticalin库 | 第68-69页 |
| ·筛选抗体库的鉴定 | 第69页 |
| ·抗体片段的表达 | 第69页 |
| ·ELISA法测定单链抗体与抗原结合特异性 | 第69-70页 |
| 3.结果与分析 | 第70-73页 |
| ·包被原蛋白浓度的测定 | 第70-71页 |
| ·RT-PCR重新构建RD模板 | 第71页 |
| ·测序结果 | 第71-72页 |
| ·表达产物鉴定 | 第72-73页 |
| ·单链抗体与抗原结合特异性 | 第73页 |
| 4.讨论 | 第73-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
