| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 细胞因子的研究进展 | 第13-23页 |
| ·细胞因子的概念 | 第13页 |
| ·细胞因子的发现 | 第13页 |
| ·细胞因子的分类与功能 | 第13-21页 |
| ·按细胞因子的来源分类 | 第13-14页 |
| ·按细胞因子的生物学功能分类 | 第14-21页 |
| ·细胞因子的一般特性 | 第21页 |
| ·细胞因子的检测方法 | 第21-23页 |
| ·生物活性检测法 | 第21-22页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第22页 |
| ·免疫学检测法 | 第22-23页 |
| 2 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 鸡白细胞介素-1和白细胞介素-6的克隆表达及纯化 | 第24-45页 |
| 1 材料与方法 | 第24-36页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第25-26页 |
| ·PCR引物设计 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-36页 |
| ·鸡淋巴细胞的诱导培养 | 第26页 |
| ·总RNA的提取 | 第26页 |
| ·ChIL-1和ChIL-6基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第27-28页 |
| ·目的基因与克隆载体PMD18-T的连接 | 第28页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定及序列测定 | 第30-31页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第31-33页 |
| ·重组阳性表达质粒的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组表达质粒在E.coli BL21(DE3)菌中的诱导表达及检测 | 第34-36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-42页 |
| ·ChIL-1和ChIL-6基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定及序列测定 | 第37-38页 |
| ·重组克隆质粒PMD18-T-ChIL-1和PMD18-T-ChIL-6的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒PMD18-T-ChIL-1和PMD18-T-ChIL-6的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·序列测定及结果分析 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的鉴定与序列测定 | 第38-40页 |
| ·重组表达质粒pET-28a-ChIL-1和PGEX-KG-ChIL-6的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒pET-28a-ChIL-1和PGEX-KG-ChIL-6的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·序列测定 | 第40页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE和Western-blot分析 | 第40-42页 |
| ·ChIL-1蛋白的SDS-PAGE分析 | 第40页 |
| ·ChIL-6蛋白的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的Western-blot分析 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析及最佳表达条件优化结果 | 第42页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析结果 | 第42页 |
| ·最佳表达条件优化结果 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| ·鸡白细胞介素-1和白细胞介素-6基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒pET-28a-ChIL-1和PGEX-KG-ChIL-6的构建 | 第43页 |
| ·重组表达质粒pET-28a-ChIL-1和PGEX-KG-ChIL-6在E.coliBL21(DE3)中诱导表达 | 第43-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 第三章 鸡白细胞介素-1和白细胞介素-6双抗夹心ELISA检测方法的建立 | 第45-67页 |
| 1 材料与方法 | 第45-52页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要的溶液及其配制 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·重组的鸡白细胞介素-1和白细胞介素-6抗体的制备 | 第46页 |
| ·间接ELISA方法检测抗血清效价 | 第46-47页 |
| ·抗体的纯化 | 第47-48页 |
| ·抗体的SDS-PAGE电泳分析 | 第48-49页 |
| ·兔抗ChIL-6酶标抗体的制备 | 第49页 |
| ·兔抗ChIL-6酶标抗体效价的检测 | 第49页 |
| ·双抗夹心ELISA方法的建立 | 第49-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-64页 |
| ·ChIL-1双抗夹心ELISA检测方法的建立 | 第52-58页 |
| ·间接ELISA方法检测ChIL-1抗血清的效价 | 第52-53页 |
| ·抗ChIL-1抗体的SDS-PAGE电泳分析 | 第53页 |
| ·ChIL-1双抗夹心ELISA方法最佳试验条件的确定 | 第53-56页 |
| ·ChIL-1双抗夹心ELISA检测方法标准曲线的建立 | 第56-57页 |
| ·ChIL-1双抗夹心ELISA检测方法重复性测定 | 第57-58页 |
| ·ChIL-6双抗夹心ELISA检测方法的建立 | 第58-64页 |
| ·间接ELISA方法检测ChIL-6抗血清的效价 | 第58-59页 |
| ·抗ChIL-6抗体的SDS-PAGE电泳分析 | 第59页 |
| ·ChIL-6酶标抗体效价的检测 | 第59-60页 |
| ·ChIL-6双抗夹心ELISA方法最佳试验条件的确定 | 第60-62页 |
| ·ChIL-6双抗夹心ELISA检测方法标准曲线的建立 | 第62-63页 |
| ·ChIL-6双抗夹心ELISA检测方法重复性测定 | 第63-64页 |
| ·ChIL-6双抗夹心ELISA检测方法的应用 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| ·动物的免疫 | 第64-65页 |
| ·双抗夹心ELISA方法的建立 | 第65页 |
| ·双抗夹心ELISA方法影响因素分析 | 第65-66页 |
| 4 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
